酵母（S.pombe）直接转化试剂盒

上一篇 / 下一篇 2014-11-03 15:01:46

酵母（S.pombe）直接转化试剂盒

本品为分裂酵母（Schizosaccharomyces pombe）转化试剂盒。向酵母培养液直接加入目标质粒和专用试剂，即可进行转化。利用独特技术，无需进行感受态细胞调制，经过一晚培养即可直接导入菌体。可简单进行多种基因破坏株的同时导入，因而可进行大量染色体组的筛选。请注意，本品的使用方法有适合少数检体的“软管法”和适合HT（高通量）的“96孔板法”两种。

[特点]

·加入了目标质粒和专用试剂的一步完成型。
·感受态细胞无需调制。
·使用96孔板可进行多检体处理。
·可使用软管法
·适应HT的低粘性试剂。

[试剂盒内容]

	20次用	100次用	500次用
Sp Transformation Reagent	2.25ml X 1支	11.5ml X 1支	57ml X 1支
Carrier DNA(5mg/ml)	0.1ml X 1支	0.5ml X 1支	1.25ml X 2支

[操作方法1]

■ 96孔板法

96孔板
↓←加入25μl YES培养基
菌种接入
↓在28~30℃情况下静置培养18~24小时
菌体悬浊
↓←将100μl质粒和试剂混合液
在46℃的恒温箱中放置2小时
10μl spotting
↓在28~30℃的恒温箱中放置5~7日
转化的酵母　
1）菌体接入时请使用YPD琼脂培养基。使用YES琼脂培养基可能导致较低的转化率。准备好的菌落可冷藏保存一个月。
2）* 质粒·试剂混合液的调制

·Sp Transformation Reagent……90μl

·质粒DNA……………………………1μg

·Carrier DNA………………………4μl

调制100μl灭菌水（处理多个受检体时请按情况调制所需量）

3）在42℃中放置4小时或在37℃中放置6小时也可达到效果。

[操作方法2]

■ 软管法

<酵母的培养>
2ml YES培养基
↓←菌种接入，调制至OD₆₀₀：0.2
↓←取1ml至14ml的试管中
↓←在28~30℃振荡培养,至OD₆₀₀：6.0~7.0
培养酵母液……（A）

<转化>
1.5ml的离心管
↓←将100μl质粒和试剂混合液混合
↓←加入25μl培养酵母液（A）在37℃恒温箱中放置2小时
预处理
↓在28~30℃的恒温箱中放置5~7天
转化后的酵母
1）菌种接入时请使用YPD琼脂培养基。使用YES琼脂培养基可能导致较低的转化率。准备好的菌落（96孔板）可冷藏保存一个月。
2）菌体浓度会影响转化率，请确认OD₆₀₀值
3）进行转化，酵母液请准备30次用的份量
4）* 质粒·试剂混合液的调制

·Sp Transformation Reagent……90μl

·质粒DNA……………………………1ug

·Carrier DNA……………………… 4μl

调制100μl灭菌水

[使用例子] 使用96孔板法进行转化

用96孔板法进行转化，在质粒（Leucine合成酶标识Marker）中加入S.pombe（Leucine合成酶破坏株）后，在SD培养基（-Leucine）里预处理和培养。

[使用次数]

	20次用	100次用	500次用
96孔板法	-	1板（100孔）	5板（500孔）
软管法	20管	100管	500管

[转化率] 250cfu/μg以上

追求高转化率时，参照以下URL里的高效率转化步骤（软管法）。但是，此方法需要离心分离，会降低操作的简便性。

[保存条件]-20℃保存

注）解冻产品请不要超过10次。为避免此状况，建议预先细分成合适的剂量，再保存到-20℃的环境中。

[产品资料]

产品编号	品名	规格	容量
290-64301	S.pombe Direct Transformation Kit, Wako 酵母（S.pombe）直接转化试剂盒	基因研究用	20次用
296-64303			100次用
294-64304			500次用

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