一，现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择.但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解.
1,正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团 (NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料.
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品 中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱.
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯仿 (Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等.
2,反相色谱 反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相. 反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物.
样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有 更强的保留.
常用的反相填料有C18(ODS),C8(MOS),C4(B),C6H5(Phenyl)等.
二,聚合物填料 聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在PH值为1～ 14均可使用.
相对与硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白 质等样品的分离非常有效.
现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低.
三,其他无机填料 其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化.由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的
用途.如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料.这种填料的分离不同与硅胶基质烷基 键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性,该柱填料一般比烷基
键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强,石墨化碳可用于分离某些几何导构体,又由
于HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用.氧化铝也可用于HPLC,
氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可在PH高达12的流动相中使用.
但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强,应用范围受到一定的限制,所以未能广泛应用, 新型氧化锆填料也可用于HPLC,商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应
用PH范围1～14,温度可达100℃.由于氧化锆填料几年才开始研究,加之面临的实验难 度,其重要用途与优势尚在进行中. 怎样选择填料粒度
目前,商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售,而目前分析分离主要用3um,
5um和10um填料,填料的粒度主要影响填充柱的两个参数,即柱效和背压.粒度越小,填充柱的柱效越高;小于3um的填料应用,在相同选择性条件下,提高柱效可提高分离度,
但不是唯一的因素.如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那么选择更小粒度的填料
是很有用的,3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,
3um的色相谱的背压却是5um的2倍.与此同时,柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱,以缩短分析时间,另外,可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使
用温度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色谱柱的压力。
