蛋白胨分子量的测定的原理

　　在我们对蛋白胨进行研究的时候，通常要对蛋白胨的分子量进行测定，今天我们就来了解一下蛋白胨分子量测定的原理。

　　聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离鉴定蛋白胨，主要依赖于电荷效应和分子筛效应。再与标准样品对照即可确定各区带的成分。要利用凝胶电泳测定某样品的蛋白胨分子量就必须去掉其电荷效应，使样品的蛋白胨分子的迁移率完全取决于分子量。如在电泳体系中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠。这种阴离子表面活性剂浓度大于1mmol/L时，以1.4gSDS与1g蛋白质分子结合成复合物，使蛋白胨带负电荷，这种负电荷远远超过了蛋白胨分子原有的电荷差别，从而降低或消除了各种蛋白胨天然电荷差别。

　　巯基乙醇是蛋白胨分子中二硫键的还原剂，使多肽组分分成单个亚单位。SDS可打断蛋白胨的氢键。因此它与蛋白胨结合后，还引起蛋白质构象的改变，此复合物的流体力学和光学性质均表明，它们在水溶液中的形状近似长椭园的棒状。不同蛋白胨 -SDS复合物的短轴相同，约1.8nm，而长轴改变与蛋白胨的分子量成正比。所以，各种SDS-蛋白胨复合物在电泳中的迁移率不再受原有电荷和形状的影响，而只是按照分子的大小由凝胶的分子筛效应进行分离，其有效迁移率与分子量的对数成线性关系。这样就可以根据标准蛋白胨分子量的对数和迁移率所作的标准曲线得出末知样品蛋白胨的分子量。