细胞培养四部曲

　　1.细胞培养：细胞培养条件为含有 10% 胎牛血清的培养液(根据不同的细胞选择合适的细胞培养液)，37℃下在含有 5% CO2 的培养箱中培养。

　　2.细胞冻存：细胞消化后收集， 1000rpm 离心 5min ，去上清，用 1ml 含有 10% DMSO的培养液重悬，逐级降温后转入-70℃冻存 24h，转入液氮中长期保存。

　　3.细胞复苏：将液氮中冻存的细胞取出， 37℃水浴中融化，取出后 1000rpm 离心 5min ，去上清，用培养液重悬后接入培养皿或培养瓶中培养。

　　4.细胞传代：对于贴壁细胞将培养皿或培养瓶中的培液吸干， 用灭过菌的 1×PBS 冲洗后加入一定量的 0.25% 胰酶消化，待镜下观察细胞变圆且还未漂起时，加入有血清的正常培液终止消化，吹打细胞成细胞悬液后将细胞接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。对于悬浮细胞可以直接传代也可以离心法传代。直接传代是让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3，吹打细胞形成细胞悬液后，分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。离心法传代是将细胞连同培养液一并转移到离心管内， 1000rpm，5分钟，去除上清，加新的培养液到离心管内，吹打细胞形成细胞悬液后，分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。

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