黄曲霉毒素检测方法

　　内容摘要：试剂三氯甲烷、正己烷或石油醚(沸程30～60℃或60~90~C)、甲醇、苯、乙腈、无水乙醚或乙醚经无水硫酸钠脱水、丙酮。以上试剂在试验时先进行一次试剂空白试验，如不干扰测定即可使用，否则需逐一进行重蒸。硅胶G(薄层色谱用)、三氟乙酸、无水硫酸钠、氯化钠、苯一乙腈混合液(量取98mL苯，加2mI一乙腈，混匀)、甲醇水溶液(55：45)。黄曲霉毒素B1标准溶液。

　　食品中黄曲霉毒素测定常采用薄层色谱法、微柱法、酶联免疫法(ELISA)、高效液相色谱法等。

　　(一)薄层色谱法测定食品中的黄曲霉毒素B。

　　1.原理样品中黄曲霉毒素B1经提取、浓缩、薄层分离后，在波长365nm紫外线下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。

　　2.试剂三氯甲烷、正己烷或石油醚(沸程30～60℃或60~90~C)、甲醇、苯、乙腈、无水乙醚或乙醚经无水硫酸钠脱水、丙酮。以上试剂在试验时先进行一次试剂空白试验，如不干扰测定即可使用，否则需逐一进行重蒸。硅胶G(薄层色谱用)、三氟乙酸、无水硫酸钠、氯化钠、苯一乙腈混合液(量取98mL苯，加2mI一乙腈，混匀)、甲醇水溶液(55：45)。黄曲霉毒素B1标准溶液。

　　(1)仪器校正 测定重铬酸钾溶液的摩尔吸光系数，以求出使用仪器的校正因素。准确称取25rag经干燥的重铬酸钾(基准级)，用硫酸(0.5+1000)溶解后并准确稀释至200mI。，相当于c(KeCrz07)一0.0004mol/L。再吸取25mL此稀释液于50mL容量瓶中，加硫酸(0•5+1000)稀释至刻度，相当于0.0002mol/L溶液。再吸取25mL此稀释液于50mI一容量瓶中，加硫酸(O.5+1000)稀释至刻度，相当于0.0001mol/L溶液。用1cm石英杯，在最大吸收峰的波长(接近350nto处)用硫酸(0.5+1000)作空白，测得以上3种不同浓度溶液的吸光度，并按式(10～1)计算出以上3种浓度的摩尔吸光系数的平均值。

　　(2)黄曲霉毒素B，标准溶液的制备准确称取1～1.2mg黄曲霉毒素B1标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL，避光，置于4"C冰箱保存，该标准溶液约为10ug/mL。用紫外分光光度计测此标准溶液的最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值。

　　(3)纯度的测定取5sL 10g.g/mL黄曲霉毒素B1标准溶液，滴加于涂层厚度0.25mm的硅胶G薄层板上，用甲醇一三氯甲烷(4+96)与丙酮一三氯甲烷(8+92)展开剂展开，在紫外线灯下观察荧光的产生，必须符合以下条件：在展开后，只有单一的荧光点，无其他杂质荧光点;原点上没有任何残留的荧光物质。黄曲霉毒素B1标准使用液：准确吸取lmL标准溶液(10弘g/mL)于10mL容量瓶中，加苯一乙腈混合液至刻度，混匀，此溶液1mL相当于1.O肚g黄曲霉毒素B1。吸取1.OmI。此稀释液，置于5mL容量瓶中，加苯一乙腈混合液稀释至刻度，此溶液1mL相当于0.2g黄曲霉毒素Bl。

　　再吸取黄曲霉毒素B1标准溶液(O.2gg/mI。)1.OmL置于5mL容量瓶中，加苯一乙腈混合液稀释至刻度，此溶液1mL相当于0.04肚g黄曲霉毒素Bl。次氯酸钠溶液(消毒用)：取100g漂白粉，加入500mL水，搅拌均匀。另将80g工业用碳酸钠溶于500mL温水中，再将两液混合、搅拌，澄清后过滤。此滤液含次氯酸浓度约为25g/L。若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。所得溶液的浓度约为50g/I。。污染的玻璃仪器用10g/L次氯酸钠溶液浸泡半天或用50g/L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。3.仪器小型粉碎机、样筛、电动振荡器、全玻璃浓缩器、玻璃板(5cm×20cm)、薄层板涂布器、展开槽(内长25cm、宽6cm、高4cm)、紫外线灯(100～125w，带有波长365nm滤光片)、微量注射器或血色素吸管。