国际生物医药联合研究院分析测试中心
大规模蛋白质鉴定
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下一篇 2016-10-31 10:20:10
（a） 双向凝胶电泳（2D-Gel）+电喷雾-色谱-质谱（ESI-LC-MS/MS）
复杂样品经预处理之后，通过二维凝胶电泳系统分离，对于感兴趣的蛋白质胶点，进行取点、酶解、反相色谱分离、质谱检测，得到相当丰富的数据信息。通过sequest等算法对质谱碎片离子进行比对，对胶点进行鉴定。
优势：双向凝胶电泳提供了强大的分离和制备能力，能够识别出ng （银染）或ug(考然)数量级的蛋白质；LC-MS/MS提供强大的数据采集和定性能力，能够通过庞大的数据库鉴定出胶点蛋白质。
（a） 二维色谱（2DLC）+电喷雾-色谱-质谱（ESI-LC-MS/MS）
样品通过溶液内酶解后，直接进入二维色谱系统进行分离。二维色谱是先使用离子交换色谱来做第一维分离，然后使用反相色谱柱做第二维分离。通过我们在二维色谱分离方面独特的专利方法，在第一维使用pH酸碱梯度方法来洗脱肽段，避免通常离子色谱中的盐对质谱的干扰，然后经过高效毛细管柱的反相色谱分析，配合质谱可一次鉴定超过3000个蛋白质。
优势：二维色谱或多位色谱系统的提供不逊于凝胶电泳系统的分离能力，同时大大加快了检测速度，避免了凝胶电泳系统的操作时间。
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