多功能柱净化高效液相色谱法测定步骤

　　内容摘要：多功能柱净化吸取约55mI.滤液加入多功能柱的试管中，将MFc柱套管套入试管内。缓慢将套管推至试管底部，使提取液通过MFc柱进入套管中。从套管内准确移取1.0mL净化液至5mL棕色小瓶中。于50℃下吹干。加入流动相定容至O.5mL，过0.45弘m滤膜供HPLC分析用。

　　称量天平、高速均质器、高效液相色谱仪(配荧光检测器)、柱后衍生化装置、真菌毒 ‘素蒸发器、均质器、色谱柱(C18柱，柱长150mm，内径4.6mm，填料直径5弘m)。

　　测定步骤

　　(1)提取称取试样约25g(精确至0.1g)于500mL具塞锥形瓶中，加入100mL乙腈～水(84+16，体积)提取液，以均质器高速搅拌提取3min，过滤。

　　(2)多功能柱净化吸取约55mI.滤液加入多功能柱的试管中，将MFc柱套管套入试管内。缓慢将套管推至试管底部，使提取液通过MFc柱进入套管中。从套管内准确移取1.0mL净化液至5mL棕色小瓶中。于50℃下吹干。加入流动相定容至O.5mL，过0.45弘m滤膜供HPLC分析用。

　　(3)测定

　　①色谱条件色谱柱：15cm×4.6ITim(内径)，5pm，I。icroCART C18柱。流动相：甲醇一乙腈一水(215+215+570，体积)，每升中加入120mg溴化钾及200/~L硝酸，流速1.0mI。/min。检测条件：激发波长365nm，发射波长440nm。进样量：100弘L(样液)。

　　②色谱测定以程序进样方式，移取适量的标准储备溶液，以流动相稀释成5个不同浓度的标准工作液。以化学工作站建立标准工作中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素Gl、黄曲霉毒素G2的响应值与相当于样品中黄曲霉毒素含量的线性方程，并对样液的色谱数据进行处理。在上述色谱条件下，黄曲霉毒素Bl、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G。、黄曲霉毒素G2衍生物的保留时问约为3.5min、4.2min、4.7min、5.7min。