耐热大肠菌群检验

　　国际目前耐热大肠菌群的检验方法主要有四种，NMKL有两个，分别针对不同产品，ISO有两个，仅适用于水的检验。下面以出口水产品中耐热大肠菌群的检验方法（根据NMKL、N96、1994方法整理）为例进行介绍。

1．定义：见上表。

2．适用范围：新鲜和冷冻水产品，包括鱼、鱼制品、贻贝、贻贝制品、贝类及贝类制品。

3.培养基和试剂：

1）生理盐水

氯化钠 8.5克

蒸馏水 1000mL

分装10mL管后，121℃灭菌15min。

2）月桂基硫酸盐肉汤

胰多胨 20克

乳糖 5克

氯化钠 5克

磷酸氢二钾 2.75克

磷酸二氢钾 2.75克

月桂基硫酸盐 0.1克

蒸馏水 1000mL

分装每管10mL，内加童汉氏管，121℃灭菌15min，灭菌后pH为6.8±0.2。

3）EC肉汤

胰多胨 20克

乳糖 5克

氯化钠 5克

磷酸氢二钾 4克

磷酸二氢钾 1.5克

蒸馏水 1000mL

分装每管10mL，内加童汉氏管，121℃灭菌15min，灭菌后pH为6.8±0.2。

4.操作步骤：

4.1样品处理：取不同部位渔产品剪碎，称取25克于225mL灭菌生理盐水中，充分摇匀。取上清夜1mL用灭菌生理盐水做梯度稀释。其它样品依此方法稀释。

4.2推测实验：取3个连续浓度的稀释液1mL接种内盛10mL灭菌月桂基硫酸盐肉汤的试管，于37±1℃培养两天，观察童汉氏管内是否有气泡产生。

4.3确证实验：将4.2中产气的试管接种至EC肉汤中，于44.5±0.2℃培养，24h天内产气的判为阳性。

4.4结果：根据4.3中的阳性管数，查MPN表确定每克原始样品中的耐热大肠菌群数。