志贺氏菌属检验和控制

　4.增菌培养：

　　宋内氏志贺氏菌的增菌培养；以无菌的手续称取样品25g放入事先加有0.5μg/mL新生霉素的250mL志 贺氏菌肉汤中，将此混悬液于室温中静置10min并时时振摇之。将浸液倾入灭菌的500mL锥形瓶中，调整pH，必要时用1N NaOH或1NHCL调至pH7.2±0.2，再将此锥形瓶置于加有新鲜催化剂的厌氧缸中，放入 GasPak并加水使之活化。因此厌氧罐内部温度较高，每次用后皆应将催化剂加热。将厌氧罐置于44.0℃水浴中培养20h，振摇混悬液后划线接种于麦康 凯氏琼脂平板。于35℃培养20h。

　　对其他志贺氏菌的增菌培养亦按上述方法进行。但加入新生霉素量为3μg/mL，并在厌氧环境下置42.0℃水浴培养。

　　5.志贺氏菌的分离

　　a.常规培养方法

　　检查麦康凯琼脂平板，志贺氏菌的菌落为浅粉红色，半透明，将此可疑菌落接种于下列培养基中：葡萄糖肉汤，TSI琼脂斜面，赖氨酸脱羧酶肉汤，动力试验琼脂和胰胨。置35℃培养48h，但应在20h进行检查，弃去所有有动力、产H₂S、产气、赖氨酸脱羧以及发酵蔗糖与乳糖的培养物。关于产生吲哚者，应弃去其44℃增菌物中的阳性培养物。至于42℃增菌培养中的所有可疑培养物皆有可能是阳性或是阴性，因此皆应予保留。

　　b.生理学性状

　　将初筛反应良好的培养物再接种其他生化试验，志贺氏菌的特性概述如下分离：H₂S、尿 素酶、葡萄糖、（产气）运动、赖氨酸、脱羧酶、蔗糖、侧金盏花醇、乳糖（2日）、KCN、丙二酸盐、柠檬酸盐、与水杨素皆为阴性；甲基红为阳性。用抗血清 鉴定其血清型或参照表二所列32个血清型的生物学特性进行试验。其粘液酸盐（mucate）和乙酸盐（acetate）的反应是会有所帮助的。在这些反应 中志贺氏菌一般为阴性，而不产气的大肠杆菌一般至少在此反应中的一项为阳性。

　　c.血清学性状:

　　将犊牛肉浸汁琼脂斜面的24h培养物混悬于3mL0.85%生理盐水中,使其浓度相当于 标准比浊管第5号,在洁净的玻璃平皿上用蜡笔标记9个3x1cm的方块.按照以下方案滴加混悬液，抗血清与生理盐水。

方块 　混悬液 　　　　　　　　多价血清　　　　　　　　　　 生理盐水

　 　　　　　　　　　A　 A1　 B　 C　 C1　 C2　 D　 A-D