耶尔森氏菌检验与控制

A、增菌

　　1、无菌称取25.0g样品于225mL，蛋白胨山梨醇胆汁肉汤（PSBB）中，均质30秒，置10℃培养10天。

　　2、如果怀疑产品为高含量耶氏菌，在肉汤培养前各取0.1mL划线于麦康凯琼脂和 cefsulodin�irgasan�新生霉素(CIN)琼脂。然后取1mL均质液至9mL 0.5%盐水(含0.5%KOH)中，混合数秒钟，各取0.1mL 划线麦康凯和CIN琼脂平板。将平板置30℃培养1天，把平板上生长的菌落转移到Whatmam541滤纸上，用于DNA克隆杂交技术直接检测耶氏菌的致 病基因。如果耶氏菌含量较低，省去这一步。

　　3、将经10天培养的增菌肉汤充分混合，转移0.1mL至1mL 0.5%盐水（含0.5%KOH）中，混合5-10秒。连续划线于麦康凯平板和CIN平板。另取0.1mL增菌液至1mL 0.5%盐水中，如上在划线前混合5-10秒。置平板于30℃培养1天。

B、细菌分离。

　　检查经1天培养的麦康凯平板，排除红色或粘液状菌落，挑取小的（直径1-2mm），偏平，无色的或淡粉红色菌 落。同时检查CIN平板，挑取具有紧红色中心整个边缘明显无色的小菌落（直径1-2mm）。用接种针将所选菌落穿刺接种于赖氨酸精氨酸铁琼脂（LAIA） 斜面。Christensen�s尿素琼脂平板或斜面。胆汁七叶甙琼脂平板或斜面。室温培养48小时。在LAIA中的培养物会产生硷性斜 面，酸性底层，不产生气体和H2S（KA--）的反应，被认为是尿素酶阳性的可疑耶氏菌。去除在LAIA中产H2S或产气或尿素酶阴性的培养物。

C、鉴定

　　将LAIA斜面上的培养物划线接种于厌氧卵黄琼脂（AEY），置室温培养。使用AEY上的生长物进行纯度检 查、脂肪酶反应（2-5天）氧化酶试验、革兰氏染色、和生化试验的接种。将AEY上的菌落接种于生化试验培养基，置室温培养3天（动力试验培养基和MR- VP肉汤在35-37℃培养1天）。

D、解释

　　耶尔森氏菌为氧化酶阴性、革兰氏阴性的杆菌，表1和表2可用于鉴定耶氏菌的菌株和生物型。目前已知小肠结肠炎 耶尔森氏菌生物型为1B、2、3、4、5具有致病性，这些生物型和第6生物型以及克氏耶氏菌不能快速水介七叶甙和发酵水杨甙。生物型6和克氏耶氏菌相当 少，可以通过微弱发酵蔗糖加以区别，并且吡嗪酰胺酶均为阳性反应。对于生物型1B、2、3、4、5的小肠结肠炎耶氏菌可进一步进行致病性测试。

　　耶尔森氏菌为兼性厌氧菌，生长温度为-1�48℃，能在反复冷冻，缓化下存活。由于该菌可在 4℃下进行冷增菌，因此保存在4-5℃冰箱中的食品具有污染的危险。该菌要求较高的水活度，最低水活度为0.95，pH接近中性，较低的耐盐性。对加热、 消毒剂敏感。

　　控制耶尔森氏菌的关键因素包括适当的蒸煮或巴氏灭菌，适宜的食品处理以防止二次污染。进行水处理、合理使用消毒剂等控制措施。