蜡样芽胞杆菌检验和控制

A、样品制备

　　无菌操作称取样品50g放入灭菌搅拌缸内。加Butterfield�s磷酸盐缓冲稀释液450mL，以高速（18.000-21.000rpm）均质2min。用上述1:10稀释液，连续稀释供蜡样芽胞杆菌计数。

B、蜡样芽胞杆菌平板计数

　　移取10mL均质样液（1:10稀释）加到90mL空白液中，从10^-2到10^-6制备一系列稀释液，充分混匀，并继续稀释直到10^-6为 止。取样品的各个稀释液（包括1:10）0.1mL接种2只MYP（甘露醇一卵黄多粘菌素琼脂）平板，用灭菌玻璃棒在每只平板表面涂布均匀。将平板置 30℃培养24小时，并检查菌落周围有沉淀圈者，表示产生卵磷脂酶。蜡样芽胞杆菌菌落通常是粉红色，随着培养时间的延长则更明显。如果上述反应不清晰，应 将平板再培养24小时后计数，从MYP平板上挑取典型菌落5个或更多，移种到营养琼脂斜面上供蜡样芽胞杆菌证实试验用。

C、蜡样芽胞杆菌的最大近似数

　　MPN技术被推荐用于食品中低于10个/g蜡样芽胞杆菌的检验。某些不适合用平板计数法的脱水淀粉类食品也可用此法检验。

　　在胰酪胨大豆多粘菌素肉汤中接种3管MPN系列，10^-1、10^-2、10^-3的稀释液各接种1mL于3管。将培养管置30℃培养48±2小时，检查生长密集、典型的蜡样芽胞杆菌。将阳性管培养物划线接种于MYP平板，于30℃培养24-48小时。以下步骤同B。

D、蜡样芽胞杆菌的证实试验

　　从MYP琼脂平板上挑取5个或更多的伊红粉色，卵磷脂酶阳性的菌落，移种到营养琼脂斜面上，置30℃培养24 小时。取培养物作了革兰氏染色和显微镜观察。再用3mm直径的接种环取培养物到装有0.5mL灭菌磷酸缓冲稀释液的13×100mm试管中，充分混悬均 匀。用于下列试验。

·酚红葡萄糖肉汤

·硝酸盐肉汤

·改良的V-P培养基

·酪氨酸琼脂

·溶菌酶肉汤

·MYP琼脂

　　蜡样芽胞杆菌的分离物应符合下述条件。

1)革兰氏阳性产芽胞大杆菌，其芽胞不突出体外；

2）在MYP琼脂上产生卵磷脂酶而不发酵甘露醇；

3）厌氧培养生长，发酵葡萄糖产酸；

4）还原硝酸盐；

5）VP阳性；

6）分介L-酪氨酸；

7）在含0.001%溶菌酶的培养基中能生长。

E、蜡样芽胞杆菌群的鉴别试验

　　从表1可见D部分所述的生化特性为蜡样芽胞杆菌群所共有。要鉴别典型蜡样芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌群的其它种还需进一步进行下述试验。

·动力试验

·根状生长试验

·溶菌活性试验

·蛋白质毒素结晶试验

　　蜡样芽胞杆菌具有动力、强溶血、不形成根状菌落，或不产生蛋白质毒素结晶。

蜡样芽胞杆菌在4℃、pH4.3、盐浓度18%的条件下仍能存活或生长。

通过高温杀菌或适当的冷藏可以控制蜡样芽胞杆菌的增殖。