革兰氏阳性细菌的转化
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下一篇 2013-01-20 13:27:11
一、革兰氏阳性细菌，转化过程的几个阶段：
1.细菌感受态的形成
由于分泌一种称为感受态因子的小蛋白而导致细菌感受态的形成。
2.转化因子的吸收
双链DNA片段与感受态受体菌的细胞表面特定位点结合，并激活临近的核酸酶。DNA双链中的一条单链逐步降解，同时另一条单链逐步进入细胞。
3.整合复合物前体的形成
一种特殊蛋白与单链DNA结合，有效保护单链DNA免遭核酸酶的降解，并将其引导至受体菌染色体DNA处。
4.单链DNA转化因子的整合
转化DNA单链可以通过同源重组，置换受体细胞染色体DNA的同源区，形成异源杂合双链DNA结构。
5.转化子的形成
受体菌染色体组进行复制，杂合区段亦半保留复制，当细胞分裂后，此染色体发生分离，于是新形成一个转化子。
二、影响转化的因素
1.DNA能否进入细胞；
2.DNA进入细胞后的稳定性；
3.质粒DNA的大小，大质粒的转化效率低于小质粒，到目前，大于30kb的质粒，转化效率仍很低；
4.DNA的浓度、纯度和形状；
5.诱导感受态细菌所用的离子的种类和浓度；
6.热休克时间的长短及平板培养条件等。
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