【求助】在纯化过程中哪一步能大量除去内毒素？

最新回复

• 生物迷 (2015-8-05 16:19:49)

  
  化学药中，活性炭吸附很有效果。。。

• 生物迷 (2015-8-05 16:20:07)

  你上面提到的工艺，如果介绍详细一些，估计大家可以更好的帮助你。

• 66+77 (2015-8-05 16:20:26)

  是的，不够详细，比如阳离子层析，内毒素一般都存在于穿透液中，不会和填料吸附。但不知道楼主的工艺中，阳离子层析收集的是穿透还是洗脱

• 66+77 (2015-8-05 16:20:42)

  QUOTE:

  原帖由 Ao7 于 2015-8-5 16:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  单抗三步纯化：Mabslect Sure、阳离子交换、capto adhere，内毒素检测一直不合格。想请教各位前辈其中那步能大量去除内毒素，操作中有哪些注意点？谢谢！ ...

  记得之前看到原研药欧盟生产工艺的介绍，应该是protein A和阴离子交换

• Ao7 (2015-8-05 16:21:16)

  
  第一步亲和洗脱用pH3.8的柠檬酸缓冲液，阳离子收集洗脱液，离子梯度洗脱，最后过Capto adhere。要求内毒素低于10EU/剂量，但我们几乎每次都超标很多，有时高达12EU/mg。缓冲液内毒素为0.03EU/ml

• eve_49 (2015-8-05 16:35:38)

  
  1，应该说，每一步都能有效去除大部分内毒素。
  2，哺乳动物细胞的发酵产物，内毒素水平本就不高；但抗体蛋白量很大，控制每剂量内毒素是有难度。但是12EU/mg，这个也太高了！！ ！
  3，起始缓冲液合格，注意操作过程中的外源内毒素引入。
  4，你应该检测每步骤前后的样品总内毒素水平（eu/ml，总体积），不要做到最后才测一下eu/mg。

• Ao7 (2015-8-05 16:36:03)

  
  GE的技术支持那边应该也能提供些参考意见吧。

• remonte (2015-8-05 16:36:27)

  
  阳离子的流穿会去除大部分的内毒素，收集洗脱液的话应该没有问题。不过梯度洗脱，放大会比较麻烦吧。可以再优化下。同意楼上的观点，注意外源引入的内毒素。

• cj_mondy (2015-8-05 16:36:50)

  阳离子可以穿透内毒素，阴离子一般可以吸附内毒素，因为内毒素等电点较低。adhere 中就有阴离子交换基团，也会吸附内毒素。同意楼上所说，抗体表达不应该有这么多内毒素，注意环境和操作过程的控制吧

• bs4665 (2015-8-05 16:37:55)

  
  实在没辙了就过一步Q层析，或专门去内毒素的填料

• ldh (2015-8-05 16:38:10)

  不知道你的蛋白是怎样的，一般低电导偏碱性pH下，用阴离子的流穿模式去除内毒素的效果非常好的。一般我们的样品经过这一步后，内毒素都及格。阳离子的结合模式也能较多的去除内毒素，但是比较关键的是你每步所用的器具都应该去内毒处理（包括称量试剂的）（干热或者碱处理）。你们内毒检测是怎样的？一般我们的检测缓冲液是检测不出来的，要是缓冲液都能检测出来，一般就是操作过程污染了，控好这些内毒基本就没问题了。

• Ao7 (2015-8-05 16:38:37)

  QUOTE:

  原帖由 ldh 于 2015-8-5 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  不知道你的蛋白是怎样的，一般低电导偏碱性pH下，用阴离子的流穿模式去除内毒素的效果非常好的。一般我们的样品经过这一步后，内毒素都及格。阳离子的结合模式也能较多的去除内毒素，但是比较关键的是你每步所用的器具都应该 ...

  请问下在纯化过程中对水源有要求吗？是否非要用注射用水？我们一直用的是高纯水，内毒素<0.001EU/ml。

• whitesheep (2015-8-05 16:39:35)

  
  我们用的也是超纯水，但是内毒检测是没有的（低于试剂最低检测限），所以有点好奇你们的内毒检测是怎样操作

• veiwu (2015-8-05 16:40:32)

  你每一步操作都留样检测一下内毒素，然后就知道你哪一步去除内毒素最多了。我记得我们有个产品亲和层析这一步内毒素去除最多。

• Ao7 (2015-8-05 16:41:08)

  我们用的也是超纯水，但是内毒检测是没有的（低于试剂最低检测限），所以有点好奇你们的内毒检测是怎样操作
  
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  我们是用湛江安度斯的鲎试剂（凝胶法）灵敏度0.25EU/ml半定量检测，也用过显色法（Thermo的）定量检测。你们的试剂检测限是多少？

• eor (2015-8-05 16:41:34)

  QUOTE:

  原帖由 Ao7 于 2015-8-5 16:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  我们用的也是超纯水，但是内毒检测是没有的（低于试剂最低检测限），所以有点好奇你们的内毒检测是怎样操作
  
  ========================================================================================================== ...

  看来都是差不多的，我们也是安度斯，但是这个灵敏度0.25的怎么能检测到小于0.001的结果呢（
  即便是定量法鲎试剂 最低检测限也是0.005 EU/ml吧）

• 8s5g (2015-8-05 16:42:24)

  
  0.001是超纯水的出水标准不是我们检测的，我们定量检测PBS内毒大约0.03EU/ml

• kulee (2015-8-05 16:43:07)

  
  层析三部都能除去内毒素，考虑哈填料CIP、SIP是否有效

• JK.jon (2015-8-05 16:43:24)

  楼主的蛋白等电点较高的话，可以考虑使用阴离子流穿模式，对去除内毒素的效果较好

• iii_ii (2015-8-05 17:08:51)

  
  还是要从源头开始注意