【求助】求提血清miRNA经验

最新回复

• seagate (2016-1-06 14:44:36)

  你提取的miRNA纯度很低，是因为产量太低，导致仪器测量所得到的RNA纯度不够准确。不知道你是用多大体积的serum来提取miRNA的，建议参考PNAS这篇文章，尤其是附件里面的方法： cuturl('http://www.pnas.org/content/105/30/10513.abstract')
  以及： cuturl('http://www.gene-quantification.de/mcdonalds-et-al-circulating-microrna-preanalytical-2011.pdf')

• join (2016-1-06 14:44:53)

  
  我用的200ul血清加1ml的Qiazol

• xevin (2016-1-06 14:45:10)

  
  我用的200ul血清加1ml的Qiazol

• mnstyle (2016-1-06 14:45:30)

  
  每一例患者血清MIRNA提取一般要多少量才能够用做后面的RT-PCR研究呢?200ul？600ul？还是1毫升？
  1、我想买QIAGEN公司的的“miRNeasy Serum/Plasma Kit”提取血清RNA，据说这公司的产品是RNA提取的领航企业， 我想这样富集的到的血清RNA会不会多一点，然后后续的RT-PCR产品，我想买TaKaRa公司的，毕竟经费受限啊，但是我的问题是不同公司的产品混用会影响实验结果吗？
  2、最近在研究QIAGEN公司的的“miRNeasy Serum/Plasma Kit”说明书时看到，说明书写了50 ，问过他们公司，每一个试剂盒只能做50个样本，并且每个样本最多200ul，不晓得如果每一个标本只提取血清200ul，这样每一个病例富集到的MIRNA辆不晓得够不够做后续的3-5个MIRNA指标的RT-PCR呢？

• jude (2016-1-06 14:45:46)

  
  ambion的miRNA kit在文献中也很多，性价比很高，可以考虑下

• wawa (2016-1-06 14:47:17)

  
  我也在做血清的miRNA,用的trizol BD,浓度超级低……现在都不知道怎么办呢……现在也在纠结大家都用什么试剂盒比较好呢？而且后续的PCR是怎么操作呢？用的通用的miRNA引物逆转录还是颈环呢？

• wawa (2016-1-06 14:48:16)

  
  我买了miRNeasy Serum/Plasma Kit试剂盒 但是还没开始提取 我们实验室有用过的 OD值都很低 但后期能测出Ct值 我也是做血清mirna的 希望能多交流交流

• Darcy (2016-1-06 14:48:31)

  
  我将要做血清中microRNA的检测，希望各位前辈多多指教啊

• yizhi (2016-1-06 14:48:53)

  我想做探针型realtimepcr，在网上查试剂ABI家的好，还是qiagen的好？多谢指教！

• 莲花白 (2016-1-06 14:49:28)

  每一例患者血清MIRNA提取一般要多少量才能够用做后面的RT-PCR研究呢?200ul？600ul？还是1毫升？
  1、我想买QIAGEN公司的的“miRNeasy Serum/Plasma Kit”提取血清RNA，据说这公司的产品是RNA提取的领航企业， 我想这样富集的到的血清RNA会不会多一点，然后后续的RT-PCR产品，我想买TaKaRa公司的，毕竟经费受限啊，但是我的问题是不同公司的产品混用会影响实验结果吗？
  2、最近在研究QIAGEN公司的的“miRNeasy Serum/Plasma Kit”说明书时看到，说明书写了50 ，问过他们公司，每一个试剂盒只能做50个样本，并且每个样本最多200ul，不晓得如果每一个标本只提取血清200ul，这样每一个病例富集到的MIRNA辆不晓得够不够做后续的3-5个MIRNA指标的RT-PCR呢？
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  您好，请问做出结果了吗，我也想用QIAGEN公司提取血浆mirna，然后用TaKaRa公司的做后续的RT-PCR,不知结果怎样。。。。。

• okhaha (2016-1-06 14:49:44)

  
  看样子，最近做血清MiRNA的朋友很多，说实话，接触了一段时间，感觉血清miRNA真心难做，浓度低，纯度低，最重要的是现在还没有一个统一的标准，手里拿着样本都在纠结该不该进行下面实验，如array或者芯片什么（虽然公司说他们有质检，如2100或者毛细管电泳什么，但说实话，都是意思一下，不怎么靠谱）。。。。。大家都说说。。。。你们是怎么弄的。谢谢各位了

• summerxx (2016-1-06 14:50:00)

  
  我做的也是，只有1.5左右，可是，师兄说是这样的结果就可以了，可以继续做了。

• Ao7 (2016-1-06 14:50:15)

  
  俺也在做，tizol L S提取的血清总RNA浓度，260/280： 1.4-1.7之间，瑞博引物套餐（含RT引物），TAKARA逆转录零散试剂，TAKARA PCR试剂：TakaraSYBR® Premix Ex Taq? II，，，，目前预实验做了8个靶点，大部分CT值在28-35之间，也有一两个CT值较高，大于35了，倒现在还在头疼，，，

• bling (2016-1-06 14:50:29)

  
  头疼啊。我做了一段时间血浆提取RNA。总之比较难

• xuuuu (2016-1-06 14:50:43)

  
  大家做的怎么样啊！本人现在也在做血浆miRNA,用AM1556提取RNA,纯度1.5左右，浓度3-5ng/ul左右,扩增曲线一般在35左右才起跳，目前很纠结，请各位前辈指点啊！你们应该做的差不多了吧

• xevin (2016-1-06 14:51:01)

  
  测血清rna浓度是和普通rna一样在紫外分光光度计上检测吗？我的浓度还行，不稳定，目前同样面临扩增时内参CT值高，不知道大家逆转录用了几微rna，扩增时用了几微cDNA？

• lgm (2016-1-06 14:51:24)

  我也是刚刚开始准备做mirna,也是用QIAgen的，各位师兄师姐多多教教我

• cocacola (2016-1-06 14:51:42)

  测血清rna浓度是和普通rna一样在紫外分光光度计上检测吗？我的浓度还行，不稳定，目前同样面临扩增时内参CT值高，不知道大家逆转录用了几微rna，扩增时用了几微cDNA？
  
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  你好，我最近也在做从血清里面去提取miRNA，现在你知道问题的答案了吗？我方便下告诉我吗？同求答案

• cocacola (2016-1-06 14:52:15)

  我也是刚刚开始准备做mirna,也是用QIAgen的，各位师兄师姐多多教教我
  
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  你好，我买了的也是qiagen的，你用了她的那个miRNeasy serum/plasma spike in control吗？