毛细管电泳实验常见问题解答

上一篇 / 下一篇  2010-07-03 14:37:17

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分析化学  仪器分析  红外光谱

 

  毛细管电泳实验常见问题解答

  (原来是EXCEL表格形式,我贴过来就有些乱,加了些序号,希望大家可以看清楚)

  按“现象 检查 方案 检查现象/结果 可能原因 解决方法”顺序叙述:

  现象一.无样品峰出现

  检查一:检查电流是否稳定

  1.没有电流 毛细管堵塞或断裂 用水冲洗毛细管,并观察是否有水流出,若无水流出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂;毛细管没有断裂的话可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题。缓冲溶液需要过滤,将样品过滤或者离心去除其中的颗粒。

  2.电流波动很大,直至几乎消失 缓冲溶液中有气泡产生或者区带中样品析出 将缓冲溶液超声脱气,如果还有此现象发生,则可能是样品区带有析出,可以通过降低样品浓度/延长ramp time来试图解决这一问题;对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品则需要在缓冲溶液中加入添加剂以解决此问题。

  3.电流初始值较小,后逐渐增大 样品进样量过大 减少进样量,通常进样参数设置在0.5psi,5sec左右

  4.电流正常

  4.1 样品浓度过低 使用高浓度样品测试,如果无法解决则有可能是以下其他原因

  4.2检测波长设置不正确 请确认被分析物的特征吸收,检查方法中的检测波长设置

  4.3分离极性错误 对于蛋白样品,请注意蛋白在分离条件下其PI及所带电荷;对于核酸样品,通常条件下会带负电荷

  4.4样品在毛细管内壁吸附 对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离,或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。

  4.5光学检测器或光纤损坏 进行标准样品的测试,如果没有对应的结果出现,则有可能存在硬件问题,请联系工程师

  检查二:检查毛细管窗口 是否有透明窗口 忘记开毛细管窗口或窗口位置不正 重新开毛细管检测窗口,或将窗口调整到正确位置

  现象二:2 样品峰出现拖尾

  样品在毛细管内壁吸附 对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离,或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。

  现象三:样品峰形不对称

  检查1:毛细管入口 毛细管入口切口不平齐 重新切割毛细管入口,注意毛细管切割方法,不可以用力过猛或反复刮擦

  检查2:更改样品溶剂 缓冲溶液与样品溶液电解率差别过大 可采用缓冲溶液作为样品溶剂

  现象四:样品峰过宽

  降低样品进样量

  有改善 样品浓度太大 可降低样品浓度或减少进样量

  无改善 样品本身性质不均一 此原因主要是针对蛋白样品,小分子样品发生的概率较低

  现象五:迁移时间不稳定

  1.出峰时间不稳定且无规律 缓冲溶液与毛细管内壁平衡较慢 每次样品运行之间避免用NaOH冲洗毛细管

  2.出峰时间依次后延 样品中有物质易发生吸附 首先在每次样品运行之前用0.1N NaOH短时间冲洗毛细管,看迁移时间能否重复,如果效果不佳请使用涂层毛细管来改善结果或者将样品再次处理,以去除样品中易吸附的组分

  现象六:峰形和出峰时间不稳定

  更换缓冲溶液种类

  1.峰形和时间稳定 缓冲溶液不稳定,易电解,或者是样品在原缓冲溶液条件下不稳定 更换其它种类的缓冲溶液

  2.峰形和出峰情况仍不稳定 样品中物质易在毛细管内壁吸附 可采用涂层毛细管来克服此问题,或对样品进行前处理

  现象七:电流泄漏(Current Leakage)

  检查毛细管是否在窗口处断裂

  1.毛细管断裂 毛细管内缓冲溶液流出造成电流泄漏 更换新毛细管,并用水清洗光纤头及检测窗口

  2.毛细管无断裂 实验环境湿度过大 使用抽湿机,并打开仪器Cartridge Cover;如果没有抽湿机可以使用空调,在湿度过大的情况下可在仪器关闭时放置干燥剂,但是在仪器运行时一定要将干燥剂取出

  现象八:无法加气压

  检查瓶塞是否盖紧或更换瓶塞

  1.更换后问题解决

  1.1瓶塞老化,失去弹性 请购买新的瓶塞,并注意瓶塞不可烘干,只能自然晾干

  1.2.瓶颈处有液体,导致瓶塞易滑 向瓶中装液体时不要过满,也不要沾湿瓶颈2.若瓶塞无问题,可先采用真空方式,若真空方式可以使用,但压力仍不可用 压力系统问题 请联系工程师

  现象九:迁移时间可重复但峰面积重复性不好

  重新切割毛细管两端

  1. 若问题解决 毛细管入口处不平 重新切割毛细管入口,注意毛细管切割方法,不可以用力过猛或反复刮擦

  2.问题依然存在,尝试电动进样 若电动进样可保持重现,则压力控制或气路存在问题 请联系工程师

  现象十:毛细管或电极易折断

  1.检查瓶盖是否老化 瓶盖老化 购买新的瓶盖

  2.电极是否不垂直 电极不垂直 将电极拉直

  现象十一:冷却液泄漏

  检查卡盒内垫圈和卡子

  1.漏装或装错顺序 严格按照操作手册上的安装顺序安装

  2.仪器内部管路密封不严 请联系工程师

  现象十二:PDA光强低

  检测窗口Aperture型号 使用了窄细缝的Aperture 请在使用DAD检测器时务必使用标有8的Aperture

  现象十三:谱图基线不稳定

  1.先用0.1N NaOH冲洗毛细管,然后不进样运行原方法

  1.1基线改善 则为样品中物质有吸附 重新预处理样品或更改电泳条件1.2基线未改善 毛细管内有强烈吸附,或缓冲体系不稳定

  2.更换新的毛细管,不进样,只运行缓冲,观察基线情况 更换新毛细管后基线仍然不稳,可采用Run Buffer A测试

  2.1 基线改善 缓冲溶液与毛细管内壁平衡较慢 更换缓冲溶液种类,若基线变化对检测无干扰,可保持原来电泳条件

  2.2基线无改善 检测光源或其他光学器件不正常 请联系工程师

  非常重要:当实验现象不正常时首先应检查电流是否稳定;而采用仪器装机时附带的Run Buffer A和Test Mix B来测试仪器则有助于您和我们的判断判断问题的所在。

 

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