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DNA提取中的细节问题

上一篇 / 下一篇  2011-05-27 11:51:58 / 个人分类:基本实验技术

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  1.巯基乙醇的作用是?可以用什么来替代吗?

  A:巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除。

  B:巯基乙醇有消泡的作用。不然你加了CTAB在震荡过程中会出现大量气泡,影响后续操作。

  关于选择替代品:

  巯基乙醇、半胱氨酸、二硫苏糖醇、谷胱甘肽及抗坏血酸等巯基试剂,是常用的抗氧化剂,抑制氧化反应,避免褐化。

  特殊情况下可以使用维生素C、硫代硫酸钠;

  也可以在提取过程中使用聚乙烯吡咯烷酮(PVP), PVP与酚类结合,也可以起到防止酚类干扰的作用。

  根据不同的植物组织,需要选择不同的抗氧化剂。

  2.紫外吸收法测DNA浓度时,发现OD280很高,是什么原因?

  目前检测DNA 的纯度最常用的方法是测定DNA 在230、260、280 nm的吸收值,

  通过计算OD 260/ OD 280 来评价DNA 的纯度, 通常认为OD 260/ OD 280 在1. 8~2. 0 表明 DNA 的纯度较好。

  DNA的紫外吸收高峰在260nm处;蛋白的最大吸收在280

  --> OD280偏大是蛋白(杂质)含量太高。

  3.其他试剂的作用:

  SDS:是一种阴离子去垢剂,在高温(55~65 ℃) 条件下能裂解细胞,使染色体离析、蛋白变性,

  同时SDS 与蛋白质和多糖结合成复合物,释放出核酸;

  Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;

  EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性;

  NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中;

  TE缓冲液溶解TE中的EDTA能螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNasepH值为8.0,可防止DNA发生酸解。


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