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分享:哺乳类实验动物病理剖检方法

上一篇 / 下一篇  2010-07-08 10:59:04 / 个人分类:动物解剖实验

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  一、 基本要求

  (一)实验动物背景资料记录

  (1) 实验动物来源、种类、年龄、性别、原编号、体重、临床症状等。

  (2) 剖检时间、地点,麻醉方法、时间、麻醉者,处死方法、解剖者、记录人、温度、湿度。

  (3) 其他指标:动物剖杀前禁食(不禁水)时间一致,为12h。

  (二)体表检查

  一般用于组织学取材的实验动物剖杀前应先隔离检疫 7~10d,用于实验组和对照组动物的病理剖检视不同动物实验的要求而定。剖检前的体表检查项目如下:

  1. 发育状态

  体格发育是否与年龄、品种相称,各部发育比例是否正常,有无畸形。

  2. 营养状态

  丰满还是消瘦,检查时可用手抚摸实验动物背、腰部,营养良好时,背腰部厚实,皮肤弹性好。营养不良时,背腰部椎骨突出,肋骨明显。

  3. 精神状态

  实验动物的自主活动、运动情况,对外界的反应(迟钝或亢进)、步态如何。

  4. 感觉器官

  眼睛的瞳孔是否清晰等,有无分泌物,眼睑有无发炎及红肿,球结膜颜色变化,有否潮红、苍白、黄染或发绀。

  5. 呼吸系统

  呼吸动物如呼吸次数、节律、有无呼吸困难;上呼吸道检查如鼻腔分泌物多少、有无喷嚏和咳嗽;必要时可通过听诊检查肺部。

  6. 消化系统

  采食与饮水观察,包括食欲废绝、减退、亢进和异嗜,口腔黏膜颜色和气味。有无呕吐、腹泻、便秘,肛周有无污物,粪便数量、硬度、颜色、气味等。

  7. 被毛和皮肤

  检查皮肤颜色、温度、弹性、有无创伤、脓疡、疥癣、湿疹,毛发色泽、疏密、有无脱落。

  (三) 病理取材基本要求

  (1) 病理检查应分层次进行,先进行一般外观观察,然后剖检观察,再进行光镜详细检查。

  (2) 通常选择正常与病变交界处组织,即包括病变本身及病变周围组织。

  (3) 对照组动物相同器官取材时,选材部位应尽量一致。

  (4) 肉眼看不到的明显病变时,各试验组选取标本位置应一致。

  (5) 所选组织应包括脏器全部层次结构或重要结构,如肾应包括皮质、髓质和肾盂。

  (6) 体积大和分叶的器官,应视不同组织选取多个部位,小器官可整体取材并固定,如淋巴结、扁桃体、甲状腺等。

  (7) 胃肠标本应将内容物冲洗掉,以免内容物影响组织固定,产生自溶。

  (8) 所取材料应尽量保持肉眼标本的完整性,不宜过厚或过薄,一般厚约3~5mm,大小为1.5~2cm2。

  (9) 切取组织时不要挤压,使用锋利刀具,少用剪刀,勿选用被器械钳压过的部位。

  (10)标本取材要熟悉,尽可能快的完成整个过程,特别是易自溶的组织,如肠道、脑、腺体等。

  (11)剖检记录应客观、详细,用形象描述而不能用诊断的病名来代替。

  (12)同一实验中的对照组和实验组动物应交叉剖检,严格统一各种条件和操作,尽量避免各种可能的干扰因素。

  二、 病理剖检基本操作

  (一)常用器械及使用方法

  1. 解剖刀

  主要用于切开和分割软组织,刀片宜用血管钳(可持针钳)夹持安装,避免割伤手指。常用的持刀法有以下4种:执弓式、抓持式、执笔式、反挑式。

  2. 手术剪

  用于分离与剪开

  3. 血管钳

  用于分离和钳夹组织,钳夹缝合针和布巾等。

  4. 手术镊

  用于夹持组织,以利于解剖和缝合。

  5. 拉钩

  用于牵引和暴露

  (二)基本操作

  1.切开

  在同一平面上时,先绷紧组织,将刀刃与平面垂直,用力要得当,一次垂直切开,切口整齐而不偏斜,禁止斜切和锯切,以减少损伤。切开多层组织时,一般应按组织层次分层切开,避免损伤深层组织器官。

  2.组织分离法

  可用锐性分离法,使用刀、剪等锐性器械直接切割,如皮肤、黏膜、精细结构和紧密连结组织的分离;也可用钝性分离法,使用分柄、止血钳、剥离器,手指等分离,如肌肉,疏松结缔组织等的分离。

  3.结扎

  用丝线打结的方法扎组织和血管,参与缝合器官和皮肤。

  4.止血

  大量出血导致胸、腹部积血使剖检视野模糊不清,可能会影响和干扰病变的辨别和取材,因此动物剖检有时要求止血。

  (1) 纱布块压迫止血法。剖检过程中,为观察病变性质和部位,辨清组织和神经、血管通路,以及对较广泛的毛细血管渗出,可用纱布按压施行短暂性的止血,但不可用纱布来回擦拭血液,以免损伤组织。

  (2) 钳夹止血法。先用纱布块止血,看清出血点或血管后用止血钳的尖端垂直对准出血点,迅速而准确的钳夹并捻转,使血管闭塞而止血。

  (3) 结扎止血法。用于动脉出血或较大的血管出血。

  三、 剖检取材程序

  (一)实验动物尸体的固定

  通常为仰卧位固定。

  (二)剖检顺序

  多为先腹腔后胸腔,再脑、脊髓、骨髓、皮肤肌肉等。取材顺序基本与此相同。

  (三) 检查内容

  1. 位置

  有无移位、异位

  2. 大小

  体积增大、缩小或肿大

  3. 色泽

  整体或局部颜色的增减改变。

  4. 附加物

  有无出血、积液、粘连。

  5. 质地

  硬、韧、软等。

  6. 切面

  多汁、泡沫状、带血、脓汁、干燥等。

  7. 中空器官的黏膜面

  有无出血、溃疡、增厚、隆起物等。

  (四)剖检和取材程度

  1. 腹腔和腹腔器官

  沿腹部正中线切开剑突至肛门之间的腹前壁,再沿最低位肋骨分别向左右两侧切开侧腹壁至脊柱两旁,完全暴露腹腔器官。观察有无积液、血液和炎性渗出物,如有则用吸管吸出,测量容积并经离心沉淀涂片检查,必要时作细菌培养。检查粘膜是否光滑,有无充血、瘀血、出血、破裂、脓肿、粘连、肿瘤、寄生虫等,膈的紧张度及有无破裂。

  (1) 脾脏。检查大小、厚薄、硬度、性状、色泽、有否肥厚、破裂等。然后沿长轴将脾切成两半,切面要平整,检查脾小梁、红髓、滤泡的色泽,切面的出血量。

  (2) 胰腺。检查胰腺色泽和硬度,切面检查有无出血。

  (3) 胃肠。检查胃的大小、胃肠道浆膜面的色泽,有无粘连、肿瘤、寄生虫结节。然后沿胃大弯、肠系膜附着部依次剪开胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠。观察胃内有无异物,内容物的气味及性状,除去内容物,检查黏膜颜色,有无充血、出血、化脓。采用边剪开边观察的办法检查肠管,观察肠内容物数量、性状,有无气体、血液、异物、寄生虫,肠黏膜皱壁有无增厚、水肿、充血、粘液量、溃疡、坏死、淋巴组织性状及有无炎症。

  (4) 肾脏。首先检查肾脏大小、硬度、被膜是否容易剥离,肾表面的色泽、平滑度,有无疤痕、出血变化。然后检查切面皮质和髓质的色泽,有无瘀血、出血、化脓和梗死。注意观察皮质和髓质交界处的切面是否隆突,以及肾盂、输尿管、肾淋巴结的性状,有无肿瘤及寄生虫等。

  (5) 肝脏。首先检查肝脏的大小、被膜的性状、边缘的厚薄、实质的硬度和色泽,以及肝淋巴结、血管、肝管等的性状。然后作切面,检查切面的出血量、色泽,肝小叶性状、有无脓肿、肝坏死等变化。

  (6) 肾上腺。观察外形、大小、色泽和硬度,作纵切和横切,检查皮质和髓质的色泽及有无出血。

  2.盆腔器官

  (1) 膀胱。检查膀胱的大小、尿量及色泽,黏膜有无出血、炎症和结石等。

  (2) 雄性生殖器官。检查睾丸、附睾、凝固腺、前列腺有无粘连、出血、水肿、积液等。

  (3) 雌性生殖器官。沿子宫体背侧剪开子宫角,检查子宫内膜的色泽、有无充血、出血、炎症等,观察卵巢和输卵管有无粘连、出血、水肿、积液等。

  3.胸腔、口腔及其器官

  用镊子夹住胸骨剑突,剪断膈肌与胸骨的连结,提起胸骨,在胸椎两侧分别剪断左、右侧胸壁的肋骨,取下整个胸壁,打开胸腔,依次取出胸腺和心脏。将下颌骨的两下颌支内侧与舌连结的肌肉切断,将咽、喉、气管、食道与周围组织分离,用镊子夹住气管向上提起,剪断肺与胸膜的连结韧带,然后将咽、喉、气管、食道连同整个肺脏一并取出。如有积液应观察其数量和性状,尽量吸取,测量容积并涂片,检查胸膜色泽,有无出血、充血或粘连。

  (1) 心脏。剪开心包膜,暴露心脏,注意心包的光泽度及心包内液体的情况,心脏的大小、外形、心外膜情况。自下腔静脉入口处至右心房作直线剖开,从此直线中点沿心脏右缘剖至心尖部,从距离心尖部与心室间隔右侧1cm处平行地剖至肺动脉;检查右心房、右心室、三尖瓣、肺动脉瓣、腱索有否病变。自左右静脉入口处将左心房直线切开,沿心脏左缘剖至心尖部,再从距离心尖部与心室间隔左侧1cm处平行地剖开左心室的前壁和主动脉,检查二尖瓣、主动脉瓣、腱索有无病变,左心房、左心室内壁有无出血和感染。自冠状动脉口起剪开前降支和旋支,在主动脉根部右侧,于右心室的心外膜找到右冠状动脉主干,先横切一刀,再剪至后降支;观察有无粥样硬化和血栓等。

  (2) 口腔。检查牙齿的变化,口腔黏膜的色泽、有无外伤、溃疡和白斑,舌黏膜有无出血、外伤及舌苔的情况。

  (3) 咽喉。观察喉头、会厌软骨黏膜的色泽、淋巴结的性状及喉囊有无积脓。

  (4) 鼻腔。检查鼻腔和鼻中隔黏膜的色泽、有无出血、炎性水肿、结节、糜烂、溃疡穿孔及疤痕等。

  (5) 下颌及颈部淋巴结。检查下颌及颈部淋巴结的大小、硬度、有无出血和化脓等。

  (6) 气管。检查气管有无出血、黏液量等。

  (7) 肺脏。检查肺的色泽、有无出血、炎症、肺气肿、肺萎缩、肿瘤等。

  (8) 其他器官。胸腺,甲状腺,扁桃体等的色泽、有无粘连、出血、水肿等。

  4.颅腔及脑

  以猴为例,剥离颅顶部软组织,沿眉弓至枕外隆凸上0.5cm处的连线,用弓形锯环绕该线锯开颅骨外板及板障,然后用丁字凿轻轻凿开内板,揭开颅盖,此时可见覆盖于脑表面的硬脑膜,切开硬脑膜暴露脑组织,在距颅骨锯口断端上0.5cm处,从前向后环行剪开硬脑膜,枕部的硬脑膜应保留 1.5cm长,防止取脑过程向后推压脑组织时,枕骨断端损坏枕叶脑组织。向后方轻轻揭起硬脑膜及大脑镰,暴露脑组织,用手指从额骨前上方伸入颅前窝,轻轻推压大脑额叶,直至见到筛板上的嗅球为止,切断嗅丝与嗅球的联系,将嗅球与脑一齐拉起,见到视神经和视交叉时立刻停止,在脑底附近依次切断颈内动脉、视神经,再将脑向后拉,可见到垂体及漏斗,继续将脑向后拉起,切断连于脑的脑神经。从脑干腹侧面把手术刀伸入枕骨大孔,切断脊髓,即可将脑取出,用流水冲洗干净备用。新鲜脑很软,易变形和受挫伤,操作过程中必须用手扶托,取出脑后应立刻用纱布包裹,浸泡固定液中保存,以免变形。

  检查软脑膜、硬脑膜血管充盈情况,脑回之间的脑沟中液体的数量与色泽,脑表面凸起或凹下的地方是否明显,可用手触膜判定其硬度。用刀将脑做一水平切面,保留胼胝体,暴露侧脑室,注意检查尾状核有无出血、软化灶。侧脑室内容物数量、性质,然后将脑做多处切面,检查有无变化。

  四、脏器测量和称重

  (1) 解剖后应迅速将脏器称重,以免水分蒸发造成差异,特别是肾上腺等小器官的称重。

  (2) 脏器称重前应尽量将周围脂肪组织和结缔组织剔除,并用滤纸吸去脏器表面血液及体液,特别是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的器官,更要新鲜称重,防止器官干燥失水而重量减轻。

  (3) 空腔器官称重前,应清除其腔内液体,如心脏应除去血块。

 

 

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