用Multiporator在Hela 细胞中实现高效基因沉默

上一篇 / 下一篇  2011-08-03 15:14:40

  • 文件版本: V1.0
  • 开发商: 来源网络
  • 文件来源: 网络
  • 界面语言: 简体中文
  • 授权方式: 免费
  • 运行平台: Win9X/Win2000/WinXP

  用 RNA 干扰可以实现特异的转录后基因表达抑制(基因沉默) ,这一过程可以由同源靶 mRNA 的双链 RNA 分子  (dsRNA)来启动。

  这一高度保守的机制在许多低等和高等的真核系统中存在,于 1998 年首次由Fire等通过对C.线虫的研究来阐述。

  RNA 干扰中起关键作用的分子是 siRNA(小干扰 RNA) ,这是携 RNase 酶活性的 Dicer 蛋白作用的结果,Dicer 蛋白可以切割长双链 RNA 成 21-28 核苷长的片段。

  在随后的步骤中,双链 siRNA 与多蛋白复合物 RISC(RNA 介导的沉默复合物)相结合,并且被分成单链。

  互补的靶 mRNA 被识别并且同反义链结合,最终由携核酸酶活性的 RISC 复合物降解。

  在哺乳动物细胞中,RNAi 可以通过加入或合成 siRNA 双链体,或通过可表达 shRNA 的载体系统来启动。基因表达的靶向、特异性抑制使得这一技术在基因功能的分析中特别有效。

  在这一应用介绍中,我们会告诉大家Eppendorf 的 Multiporator 系统是如何高效地采用电转染的方法,将 siRNA分子介导入Hela 细胞中。




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TAG: eppendorf multiporator 细胞电穿孔

 

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