分析液相线性放大至制备液相

上一篇 / 下一篇  2011-04-09 10:48:41 / 个人分类:学习记录

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分析液相线性放大至制备液相

制备液相放大系数:《线性放大一制备液相色谱的有效技术》

1  线性放大原理

从分析色谱过程放大到制备色谱过程,通常要考虑的因素包括色谱柱尺寸、填料、流量、操作压力、进样量、产品纯度、产品回收率、色谱分离效果等,以上的各种因素包括可变因素和不可变因素。进行线性放大的基本假设是分析色谱系统和制备色谱系统的化学性质,传质过程都保持不变,而将进样量、流量、收集体积等乘以线性放大系数。线性放大系数即为制备色谱柱截面积与分析色谱柱截面积之比。

可变参数:
       流量
    样品进样量
检测器流动池尺寸
    溶济消耗
    产品产量
    系统死体积
进样管体积
样品收集体积

不可变参数:
填料种类
色谱柱长度
色谱柱背压
样品浓度
回收率
    纯度
件度
操作时间
色谱柱性能
操作温度

检测波长的选择:
与分析型色谱相比较,制备色谱所选择的检测波长并不一定是目标成分的最大吸收波长,选择一个可以监测到目标成分和干扰成分分离的波长更加合适。

最佳进样量的选择:
制备色谱以获得大量的单成分为目的,所以确定最佳进样量是制备色谱优化的一个主要方面,希望通过加大进样量,寻找保证分离效果的最大过载进样量来提高工作效率。加大进样量由样品溶液的浓度和进样体积两方面决定。在确定了样品溶解条件后,样品溶液的浓度即已确定。在样品浓度一定的情况下,通过增大进样体积来增大进样量。随着进样量的增加,目标成分与相邻成分的分离度会逐渐降低,影响目标组分的分离,进样量达到一定量后,相邻成分无法分离。

通过实验各种进样量,来确定最佳的进样量。

制备型色谱流动相的流速、进样量分别按照如下放大公式计算:

Fp=Fa×(Dp/Da)2Lp=La×(Dp/Da)2

(式中Fp为制备型色谱流动相流速,Fa为分析型色谱流动相流速,Dp为制备柱的直径,Da

为分析柱的直径,Lp为制备型色谱进样量,La为分析型色谱进样量)

 

 问:同一种填料的分析柱、制备柱按线形放大公式套,分离度会不会变化?
答:一般会有一定的变化,原因有以下几点
(1) 制备柱的装填是否均匀,如不均匀则可能产生涡流扩散使各个组分的经过通道的直径不同、阻力不一样,停留时间不同,色谱峰可能变宽。
(2) 如果样品在流动相中溶解度小,在制备色谱上会有不同的峰展宽。
(3)如果样品在分析柱上有展宽或拖尾的现象,放大到制备柱上后峰的展宽和拖尾经常会非常严重,导致分离失败。

 

2 柱超载方式的影响
利用制备型HPLC分离纯化蛋白质,采用柱超载方式操作可以提高蛋白质的制备量。常用的柱超载方式主要有二种:一种是使用较小的样品注入体积,但增加样品浓度,即所谓的“质量超载”;另一种是保持较小的样品浓度,但增加样品的注入体积,即所谓的“体积超载”。

在蛋白质制备分离过程中,虽然采用质量超载或体积超载均可提高蛋白质的制备量,但当一次操作所需处理的样品量较少时,应尽量采用质量超载方式。就实用的观点而言,只有当一次操作所需处理的样品量太大,导致分离效果不能满足分离要求或样品在流动相中的流动度达到极限时,才采用增加进样体积的办法来提高蛋白质的制备量


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hh750 引用 删除 hh750   /   2011-04-27 17:55:28
好东西,好好学习
hh750 引用 删除 hh750   /   2011-04-27 17:55:17
-5
358uwcj 引用 删除 358uwcj   /   2011-04-18 15:00:12
很好的东东。拜读了!!!!
qianxiang23 引用 删除 qianxiang23   /   2011-04-18 14:59:50
5
yyid 引用 删除 yyid   /   2011-04-18 14:59:33
写的不错噢!楼主原创吗?
yexuqing 引用 删除 yexuqing   /   2011-04-18 14:58:44
很好 很给力,希望多多分享经验哦。
lvmaomao 引用 删除 lvmaomao   /   2011-04-18 14:58:13
好东西,学习了。。
miracle 引用 删除 miracle   /   2011-04-18 14:57:10
5
 

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  • 更新时间: 2011-04-09

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