购买国外细胞株应该注意的事项

上一篇 / 下一篇  2011-03-09 11:50:23

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  由于现在国内的细胞库资料不是很充足,而且比较零散,包括建株时的技术层面不一,没有比较严格统一的操作规范,所以在遇到比较重要的实验项目时,一般都比较倾向于购买国外的细胞株,但购买国外细胞株需要考虑的因素有如下几点:

  1、细胞株的生物等级,由于有些细胞株及菌株属于管制品,所以从国外购货比较麻烦。

  2、在购买国外细胞株时,需交待国外加比较多的干冰(一般在13公斤以上,采用比较密封的泡沫盒加套纸箱。

  3、报关时尽量提供比较充足的证明材料,以免担搁时间而导致干冰挥发完细胞株死亡,甚至于被退回给发货人。

  4、如果通过国外细胞株在国内的代理商购买的话,合同中需注明以下一些内容:

  a.明确的到货时间,这个时间需注明的是工作日,还是普通日。

  b.采用什么样的运输方法?

  c.如果属于技术外的因素而细胞株无法培养活,供方需负什么样的责任?

  d.细胞株的详细资料,以及细胞株的代数,其中,ATCC的细胞株一般都在几十代,这个需要与国外确认,IST-Banca可与他们的代理商联系索取详细资料!

  e.需在合同中注明原装进口,避免相关公司鱼龙浑杂,从国外购买回一株细胞株,经过培养传代后,同时供应给几个人;一般国外进口的细胞株都会有原装的冻存管,而且每一支冻存管上都会有批号,而且每次的批号都不一样。

  f.在决定购买细胞株之前,必须仔细阅读他们的培养信息,所谓“细胞株未到,培养基先行一步”。

  g.在接到细胞株后,最好要求供应公司的人员现场参与,从而用于确认责任。

  h.在培养前,请确认您的二氧化碳培养箱二氧化碳浓度的准确性,国外的细胞株建议用进口的细胞培养瓶,比如:orange,corning, falcon品牌的培养瓶。

  i.询问你的代理商或者经销商,接到细胞株后是否需要离心置换出DMSO,因为有些细胞厂家建议不要离心,他们会认为离心而导致的碎片比DMSO产生毒性的害处更大,如果可以离心,转速不要过高,一般都在1000转以下,此处需要注意,因为有的公司会拿这一点来拒绝索赔!

  j.培养基的服务,仔细与供应商确认培养基的品牌及份量,以免供应商以些理由来推翻你索赔的理由。

  k.在细胞株复苏时,一定要先想好步骤再做,一步一步来做,避免导致操作中的污染,复苏是一个非常重要的步骤,往往容易导致污染,然后为污染所导致的杂质而伤透脑筋。

  细胞运输中,还要注意细胞株的反复冻融情况,有的供应商在供应细胞株或者培养基时,特别是需要低温保存的培养基时,通常会出现运输温度与储存温度的差别,而导致培养基或细胞株融掉后又放进低温冰箱进行冻存,然后再快递给我们,特别是血清类制品,如果在接到培养基并解冻后,沉淀和絮状物较多时,那就要怀疑是否是这种情况!

  对于所买回来的细胞签别,除了显微镜下的形态学观察,还有就是特异性实验,这也是比较重要的!细胞株有些时候复苏后刚培养的时候,老师们发现从形态上判断似乎不是自己所需要的细胞株,于是我就建议他做细胞属性的特异性实验,ATCC的技术资料最后面附有细胞株的代数,以及细胞株经过了哪些检测,细胞株特异性实验的方法,从而用以确认真正是自己所需要的细胞株!冻存的细胞株,特别是从国外进口的细胞株,应该立即复苏,尽量不要再冻存,反复冻融会导致细胞株复苏后的活性低!第一次接种培养时,应以进口的25平方厘米的培养瓶为佳,现在市面上的主要有 orange,cornig,BD(Falcon),其中orange价格比较公道5-6元/个,BD(Falcon)最贵10元左右每个,BD的产品一般用于医院生殖中心实验室人工受精卵的一到三代培养!ATCC的细胞株培养基分为完全培养基(原代培养),次培养基(传代培养基),请大家要注意!

  如果细胞运来后,应该马上进行复苏,复苏时,迅速投入37摄氏度水浴中并不断振摇,使之迅速融化,离心应在 1000转/分以下,如果太高速会使本来脆弱的细胞产生较多的碎片,培养过程中,甚至会因为碎片而出现黑点(一般都是800r/min,5min),弃上清液,以去除二甲基亚砜。加入先前配好的培养基,并在50ml培养瓶中进行培养。


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