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皮革与奶的检测标准

上一篇 / 下一篇  2011-02-18 18:07:28 / 个人分类:

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蛋白质含量测定

以下资料均摘自标准
!oujTUk)t03.3 乳汁中蛋白质含量的测定
2Tt"k)^{4CG v'`03.3.1 方法原理分析测试百科网)r#V-]p|k)s/nX
  用半微量凯氏定氮法,测定乳汁中氮的含量,从而计算出该乳汁中蛋白质的含量(%)。
-X0ta(J7odG;N03.3.2 试剂和溶液
VNW,?yh:k b03.3.2.1 盐酸(GB 622—77):0.05 N标准溶液。
uIDn1ux$S03.3.2.2 氢氧化钠(GB 629—81):饱和溶液。分析测试百科网Zx/v:ph$}0JEY n
3.3.2.3 硼酸(GB 628—78):2%溶液。分析测试百科网vlE]*v,}-\5Q
3.3.2.4 混合催化剂:无水硫酸钾或硫酸钠、硫酸铜、硒按100∶10∶2的重量比配制而成。
xgs&us:QZa9h03.3.2.5 混合指示液:以0.2%甲基红与0.1%次甲基蓝相等体积混合配成。分析测试百科网|3[!v3VW%b
3.3.3 仪器和设备
;{+I sy4N(_FT03.3.3.1 电炉:1~2组附有支撑架的可调电炉。
STx D^ V;Z%[ {03.3.3.2 凯氏烧瓶:250 ml。
q&U J7[iy'g03.3.3.3 半微量凯氏定氮仪。分析测试百科网LO4ck c6vy)|
3.3.3.4 容量瓶:100 ml。分析测试百科网2n/t mf7lh4w
3.3.4 操作分析测试百科网@ Mp u%F*}'ag
3.3.4.1 在干净的凯氏烧瓶里,加入约2 g催化剂,然后用10 ml移液管吸取经40℃升温并冷却至20℃左右的混合均匀的牛乳样品10 ml,称重后直接注入凯氏烧瓶底部,再沿瓶壁徐徐加入15~20 ml浓硫酸,并轻轻摇荡,使样品全部被硫酸脱水炭化。分析测试百科网"nBEy'H.dY
3.3.4.2 将加好试剂的凯氏烧瓶放入通风橱内的可调电炉上,先小火加热,至冒出白烟后加大火力,直至瓶内溶液变成透明淡蓝色后,再继续加热约20~30 min即可。分析测试百科网H5F8G:fp9o
3.3.4.3 将已冷却的溶液移入100 ml容量瓶内,并用蒸馏水重复冲洗凯氏烧瓶5~6次,全部冲洗液倒入容量瓶中,最后在液温20℃时定容至100 ml刻度线处。分析测试百科网s EviLQ3R0V
3.3.4.4  蒸馏:吸取容量瓶内样品10 ml放入半微量凯氏定氮仪的反应室内,加入约4 ml饱和氢氧化钠,放开蒸汽管夹,在通入的热蒸汽作用下,样品与饱和氢氧化钠反应,放出NH3,经冷却管冷却后流入盛有2%的硼酸溶液接受杯中,成为 NH4HB4O7,使原来淡紫红色的硼酸溶液(内加有适量的混合指示剂)变为淡苹果绿色,直至硼酸接受杯中溶液增加至约30 ml时取下接受杯,同时用蒸馏水少许将冷却管末端(浸入接受杯部分)残余液滴冲洗入接受杯内。分析测试百科网m-Al7K'jba!o3W
3.3.4.5 滴定:将接受杯内液体用0.05 N盐酸标准溶液滴定,至出现淡紫红色时为止,读出所消耗的盐酸毫升数。
HV D9b P P#hs03.3.5 结果与计算   

式中:CP── 蛋白质含量,%;
sd E~ AgDw-Z1c0N── 盐酸当量浓度;分析测试百科网.q.v'p:FYb nR G x
V── 滴定消耗的盐酸标准溶液的体积,ml;
8?6S%t:O[-{:d00.014── 1.0 ml的一个当量盐酸溶液相当于0.014 g氮;分析测试百科网qxaQK0M _
6.38── 为将牛乳中氮的含量转算为蛋白质量的转换值;
ai-|Zk:~5m:r V:~0W── 牛乳样品重,g。

皮革水解蛋白检测方法

1 本方法规定了乳与乳制品制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定方法。
d5U4b2rSu0  本方法适用于乳与乳制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定。分析测试百科网0oz.sY VL8CA
  本方法通过对L(-)-羟脯氨酸含量的测定,可判定是否为动物水解蛋白。

2  引用标准分析测试百科网 _8?1g l/wk`
  GB9695.23-90 肉与肉制品L(-) - 羟脯氨酸含量测定

3  原理分析测试百科网t!VZ+s ?S
  试样经酸水解,释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。

4  试剂
&yJ k-Kg-qo]0  所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水。分析测试百科网%N+Rh0Ru4C)f[0OK
4.1  氯化亚锡(GB638):0.75%溶液。分析测试百科网#Shd"MA7p \+l
  将氯化亚锡7.5g溶于500mL水中,再加入500ml浓盐酸(GB 622)。分析测试百科网z0s[z#Ur4z(e F,R
4.2  盐酸(GB622):6mol/L溶液。
d+f)eR LV3m:C l04.3  氢氧化钠(GB629);1mol/L、10mol/L溶液。分析测试百科网 Y6RD0~C6D/C!rm|
4.4  缓冲液:将50g柠檬酸,26.3g氢氧化钠和146.1g结晶乙酸钠(GB694)溶于水,稀至1L,此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。分析测试百科网 _ L)N1G*n RbjQ7~ s
4.5  氯胺T(HG3-972)溶液:将1.41g氯胺T,溶于10mL水中,依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)。分析测试百科网 yUF(cU!k+zJ
4.6  显色剂:称取10g对二甲氨基苯甲醛,用35mL高氯酸(GB623)溶解,缓慢加入65mL异丙醇。分析测试百科网];z^H-Qb%O[
4.7  L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。分析测试百科网&VL0wmng{lO
4.7.1  标准储备液500μg/mL:称取50.0mg/L(-)-羟脯氨酸用少量水溶解,加一滴6mol/L盐酸,定容至100mL容量瓶中。
M)tq;d#[ i04.7.2  标准工作液5μg/mL:吸取标准储备液5.00mL于500mL容量瓶中,定容。  

5.1  实验室常规设备。
7d0U;SB*R I@(}`05.2  配有冷凝管的三角瓶:250mL。
}CoEX T/a }+@05.3  恒温水浴。分析测试百科网3B&n?q-?q,]
5.4  试管加热器或水浴,可控温于60℃。分析测试百科网z!` k zWot l
5.5  分光光度计。

6  试样处理:
/e&pg#?w#n0  6.1  方法1:准确称取样品2-5g(液体样品5-10g)放入250mL磨口三角瓶中。加几粒沸石。加入氯化亚锡溶液100mL,置于水浴上加热回流16h。 趁热将水解溶液过滤于200mL容量瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗三角瓶和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取 5~25mL(V1)水解液于100mL烧杯中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于250mL容量瓶中,用 30mL水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。分析测试百科网?C` a z-V7}N X k.M
   分析测试百科网.}DVa M8fyZ0z n
  6.2  方法2:准确称取一定量样品,精确到0.0001g。使样品蛋白质含量在10~20mg范围内;将称好的样品放于水解管中。在水解管内加6mol/L盐酸 10~15mL(视样品蛋白质含量而定)或加入12mol/L盐酸10~15mL,含水量高的样品(如牛奶)可加入等体积的浓盐酸,加入新蒸馏的苯酚 (3.3)3~4滴,再将水解管放入冷冻剂中,冷冻3~5min,再接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0 psi),然后充入高纯氮气;再抽真空充氮气,重复三次后,在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内,水解24h 后(如加入12mol/L盐酸,水解时间可缩短至6h)后,取出冷却。分析测试百科网7iM Q%udg1~bh
打开水解管,趁热将水解溶液过滤于100mL三角瓶中,用6moL/L热 盐酸10mL反复三次冲洗试管和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5~25mL(V1)水解液于100mL三角瓶中,用10mol/L、1mol /L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于50mL容量瓶中,用水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇 匀备用。

7  分析步骤
{Z;Ro?H+q0  7.1 测定分析测试百科网J]:^!{pH#m
  7.1标准曲线的绘制分析测试百科网!AgGWM7AK
  吸取L(-)-羟脯氨酸标准工作液 0.00,10.00,20.00,30.00,40.00mL,分别置于100mL容量瓶中,定容摇匀。浓度分别为 0.0,0.5,1.0,1.5,2.0μg/mL。取不同浓度的上述溶液4.00mL,分别加入20mL具塞试管中,加氯胺T溶液2mL,摇匀后于室温 放置20min。加入显色剂2mL,摇匀,塞上塞子于60℃试管加热器(或恒温水浴)中保温20min后取出,迅速冷却,在波长558±2nm处测定吸光 值,绘制标准曲线。
M(noXsvGz0  7.2  试样测定分析测试百科网 `:Tct(@ e
从待测液中吸取已制备好的样液4.00mL于20mL具塞试管中,以下按7.1步骤进行,同时作空白试验。

8  分析结果的计算       
0rd$Nr~ p.]G@dR0

  式中:X——样品中L(-)-羟脯氨酸的含量,%;分析测试百科网.F I,G m%[ Bb6p
  C——从标准曲线上查得相应的L(-)-羟脯氨酸量,μg;分析测试百科网jZg.R+](U
  m——称取试样的质量,g;
q2H&D b!T7P}F-Y0  V1——样液体积,mL。分析测试百科网V6Jo5}+q'u
  A——稀释倍数分析测试百科网|hx5V:|:u
  当符合允许差所规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果,结果精确到0.01%。
0K H8M*@+T]09  允许差
Sq;@W?^H0  同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过平均值的5%。分析测试百科网$PUk5|-B oc%B
10   判定方法
^q2?J;d0  因L(-)-羟脯氨酸为胶原蛋白中的特有组分,其含量占10%以上;而乳蛋白中不含有此成分,如若样品中含有L(-)-羟脯氨酸,可判定添加了动物水解蛋白。

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