最新改版：HPLC的日常维护及常见故障排除

　　一下是部分文字版，完整版在链接的PPT中

　　HPLC的基本结构

　　HPLC通常由储液器、(在线脱气装置)、高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据处理系统等基本结构组成。

　　下面按仪器流路顺序依次介绍各部分的日常清洗及维护心得：

　　一，日常维护

　　1、储液器

　　Ø 流动相

　　① 过滤：微孔滤膜的选择：普通液相——0.45 mm、UPLC MS——0.22mm

　　② 脱气：脱气方式——过滤HPLC&MS;脱气，超声&在线

　　③ 储存方法：现配现用、4℃保存一周

　　2、泵的维护

　　Ø 流速的升起与降低：渐续升渐续降

　　Ø 流动相是否充足：抽入空气干磨损伤泵

　　Ø 梯度洗脱在线脱气保持开启

　　3、六通阀的使用及清洗

　　Ø 推荐清洗方法：

　　在load与inject之间切换清洗

　　Ø 推荐使用方法

　　① 完全填充环：进样量为定量环体积的2~5倍

　　② 部分填充环：进样量不大于定量环体积的1/2

　　(注：阀切换速度过慢会对泵造成损伤，并影响进样量的准确度)

　　4、色谱柱的维护及清洗

　　Ø 柱接口的维护：不宜拧过紧

　　Ø 预柱的清洗

　　Ø 反相键合相色谱柱的清洗顺序：由样品和流动相组成决定(若流动相含盐或酸碱，须先用95%水，后用95%甲醇，各20倍柱体积)

　　5、检测器的维护

　　Ø 氘灯(寿命2000h左右)

　　① 不宜频繁开关

　　② 不使用时最好关闭

　　③ 冲柱时可以不接检测器

　　二，常见故障排查

　　1、泵前流路气泡

　　Ø 原因：

　　① 滤头堵

　　② 流动相脱气不彻底

　　Ø 解决方法：

　　① 拆下滤头用纯水和甲醇各超声10min

　　② 将流动相摇匀后超声10min(1000ml)

　　③ 打开旁路purge

　　2、物质保留时间重现性差

　　Ø 原因：

　　① 流动相比例不一致

　　② 梯度洗脱平衡时间不足

　　③ 泵稳定性不好

　　Ø 解决方法：

　　① 由同一人配制并使用同一套量器

　　② 延长平衡时间

　　③ 单向阀污染，清洗单向阀(不建议)

　　3、柱压不正常升高

　　Ø 原因：

　　① 管路堵

　　② 色谱柱堵

　　Ø 排查步骤：按流路顺序方向依次排查

　　Ø 分析原因：流动相中盐析出或是其他原因

　　Ø 解决方法：

　　① 用适当溶剂冲洗或超声清洗管路

　　② 用适当溶剂冲洗色谱柱

　　4、出不规则锯齿状峰，噪音异常变大

　　Ø 原因：

　　① 静电干扰

　　② 检测池污染

　　③ 检测池有气泡

　　④ 灯能量不足

　　Ø 解决方法：

　　① 接地

　　② 用适当溶剂低流速冲洗

　　③ 排气(注意)

　　5、基线漂移

　　Ø 原因：

　　① 等度-柱平衡不足

　　② 梯度-某一相有紫外吸收、检测波长接近末端吸收

　　Ø 解决方法：

　　① 多平衡一段时间

　　② 向两相中加入等比例的盐或酸，尽量避免使用末端吸收

　　6、靠近死时间处经常出现负峰

　　Ø 原因：

　　① 样品溶剂吸光度低于流动相

　　② 洗脱出的物质在该波长无吸收

　　Ø 解决方法：

　　① 用流动相溶解样品

　　② 若不对测定造成干扰可以不予处理

　　7、液相峰分叉或肩峰

　　Ø 原因：(首先要确认是否两个物质未分开)

　　柱效降低，分离能力降低

　　Ø 解决方法：

　　① 冲洗柱子，用有机溶剂进行柱再生

　　② 倒用

　　③ 废弃换新柱

　　8、峰展宽

　　Ø 原因：

　　① 流动相选择不合适(比例、种类)

　　② 柱效下降

　　Ø 解决方法：

　　① 查化合物理化性质，调节pH抑制解离

　　② 更换溶剂类型

　　③ 更换色谱柱