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最新改版:HPLC的日常维护及常见故障排除

上一篇 / 下一篇  2011-01-15 00:07:45

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  一下是部分文字版,完整版在链接的PPT中

  HPLC的基本结构

  HPLC通常由储液器、(在线脱气装置)、高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据处理系统等基本结构组成。

  下面按仪器流路顺序依次介绍各部分的日常清洗及维护心得:

  一,日常维护

  1、储液器

  Ø 流动相

  ① 过滤:微孔滤膜的选择:普通液相——0.45 mm、UPLC MS——0.22mm

  ② 脱气:脱气方式——过滤HPLC&MS;脱气,超声&在线

  ③ 储存方法:现配现用、4℃保存一周

  2、泵的维护

  Ø 流速的升起与降低:渐续升渐续降

  Ø 流动相是否充足:抽入空气干磨损伤泵

  Ø 梯度洗脱在线脱气保持开启

  3、六通阀的使用及清洗

  Ø 推荐清洗方法:

  在load与inject之间切换清洗

  Ø 推荐使用方法

  ① 完全填充环:进样量为定量环体积的2~5倍

  ② 部分填充环:进样量不大于定量环体积的1/2

  (注:阀切换速度过慢会对泵造成损伤,并影响进样量的准确度)

  4、色谱柱的维护及清洗

  Ø 柱接口的维护:不宜拧过紧

  Ø 预柱的清洗

  Ø 反相键合相色谱柱的清洗顺序:由样品和流动相组成决定(若流动相含盐或酸碱,须先用95%水,后用95%甲醇,各20倍柱体积)

  5、检测器的维护

  Ø 氘灯(寿命2000h左右)

  ① 不宜频繁开关

  ② 不使用时最好关闭

  ③ 冲柱时可以不接检测器

  二,常见故障排查

  1、泵前流路气泡

  Ø 原因:

  ① 滤头堵

  ② 流动相脱气不彻底

  Ø 解决方法:

  ① 拆下滤头用纯水和甲醇各超声10min

  ② 将流动相摇匀后超声10min(1000ml)

  ③ 打开旁路purge

  2、物质保留时间重现性差

  Ø 原因:

  ① 流动相比例不一致

  ② 梯度洗脱平衡时间不足

  ③ 泵稳定性不好

  Ø 解决方法:

  ① 由同一人配制并使用同一套量器

  ② 延长平衡时间

  ③ 单向阀污染,清洗单向阀(不建议)

  3、柱压不正常升高

  Ø 原因:

  ① 管路堵

  ② 色谱柱堵

  Ø 排查步骤:按流路顺序方向依次排查

  Ø 分析原因:流动相中盐析出或是其他原因

  Ø 解决方法:

  ① 用适当溶剂冲洗或超声清洗管路

  ② 用适当溶剂冲洗色谱柱

  4、出不规则锯齿状峰,噪音异常变大

  Ø 原因:

  ① 静电干扰

  ② 检测池污染

  ③ 检测池有气泡

  ④ 灯能量不足

  Ø 解决方法:

  ① 接地

  ② 用适当溶剂低流速冲洗

  ③ 排气(注意)

  5、基线漂移

  Ø 原因:

  ① 等度-柱平衡不足

  ② 梯度-某一相有紫外吸收、检测波长接近末端吸收

  Ø 解决方法:

  ① 多平衡一段时间

  ② 向两相中加入等比例的盐或酸,尽量避免使用末端吸收

  6、靠近死时间处经常出现负峰

  Ø 原因:

  ① 样品溶剂吸光度低于流动相

  ② 洗脱出的物质在该波长无吸收

  Ø 解决方法:

  ① 用流动相溶解样品

  ② 若不对测定造成干扰可以不予处理

  7、液相峰分叉或肩峰

  Ø 原因:(首先要确认是否两个物质未分开)

  柱效降低,分离能力降低

  Ø 解决方法:

  ① 冲洗柱子,用有机溶剂进行柱再生

  ② 倒用

  ③ 废弃换新柱

  8、峰展宽

  Ø 原因:

  ① 流动相选择不合适(比例、种类)

  ② 柱效下降

  Ø 解决方法:

  ① 查化合物理化性质,调节pH抑制解离

  ② 更换溶剂类型

  ③ 更换色谱柱




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王玉玺 引用 删除 王玉玺   /   2012-11-22 11:10:22
很好
王玉玺 引用 删除 王玉玺   /   2012-11-22 11:10:07
5
 

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