伏马毒素检测试剂盒

上一篇 / 下一篇  2010-07-14 16:24:37

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Cat. No.951FUM01C

伏马毒素

伏马毒素(B1, B2,B3)是由镰孢菌()属念珠菌产生的真菌毒素。在世界范围内都发现了伏马毒素污染玉米的现象。研究表明伏马毒素可以诱发老鼠患肝癌,猪的肺水肿和马的脑脊髓白质病。在一些地区中玉米中伏马毒素含量很高,在这些地区(比如中国和非洲)人的食道癌具有高发性。

适用

Helic伏马毒素试剂盒原理是竞争酶联免疫反应,用于检测玉米中的伏马毒素。

原理

这个HELICA伏马素素检测试剂盒的原理是固相直接竞争酶联免疫反应。聚苯乙烯微孔板中包被伏马毒素的特异性抗体,这种抗体和伏马毒素的各个亚型都有很好的交叉反应利用90%的甲醇从样品中提取伏马毒素,把提取的样品和HRP(辣根过氧化物酶)标记的伏马毒素混匀并加入对应的孔检测。酶标记毒素与标准品或样品中的伏马毒素竞争与包被在微孔底部的抗体结合。孵育一段时间后,倒出孔里的液体,清洗除去没有反应的物质后加入显色底物(TMB),在酶的作用下孔里将会出现蓝色。显色颜色的深浅与结合物的量成正比例的关系,与标准品或样品中伏马毒素的量成反比例关系。所以,标准品或样品中的伏马毒素浓度越高,显色的蓝色将会越浅。加入酸,终止反应,底物颜色由蓝色变为棕黄色。微孔板放进酶标仪里,在OD450nm读取吸光度值。样品的吸光度值与试剂盒中标准OD值相比较,相对应得出结果。

试剂盒组成

1×小袋

抗体包被的微孔板

96孔板(12×8微孔板、包被用鼠源伏马毒素单克隆抗体)

1

预混板(绿色)

96孔板(12×8)没有包被抗体

6×小瓶

伏马毒素标准品

1.5mL/瓶,伏马毒素的浓度分别为2.5,

7.5, 20.0, 50.0, 150.0 ng/mL

2×小瓶

HRP-伏马毒素偶联物

2 x 12mL HRP-伏马毒素添加防腐剂的缓冲溶液

1×小瓶

底物试剂

15mL TMB

1×小瓶

终止液

15mL酸性液体

1×小袋

洗涤缓冲液

0.05%PBS-Tween20加入1L蒸馏水

样品测定步骤

注意:在操作时推荐使用排枪,同时每个样品都做2个平行。

1、使用前将试剂拿到室温。用1L水溶解PBS-Tween袋。

2、取出混合板放于微孔支架上用于标准和样品的测试,取相同数量的微孔(包被有抗体)置于另一个微孔支架上。

3、在每个混合板微孔中加入先加入100μl结合物溶液A(绿色),然后再加入100ul结合物溶液B(无色)。

4、在加有结合物的混合版的孔中加入100μl标准或样品,用枪头混合3次,

5、转移100ul预混板微孔中的液体到对应的包被有抗体的微孔中,室温孵育10分钟,最好使用多道移液器。混合空中的液体足够做两个平行。

6、将孔里的液体倒入合适的容器中,用蒸馏水或无离子水洗板,然后迅速弃掉洗液到合适的容器中,重复洗3次。在一层厚的吸水纸上拍板,去掉残留的洗液。

7、在吸水纸上拍打,尽可能地将水拍干。

8、每孔加入100μl底物溶剂,室温孵育10min

9、每孔加入100μl终止液。

10、对比标准和样品的颜色,或在OD450 nm读数。

结果分析

使用实验获得的OD值与伏马毒素0标准的OD值的百分比值与标准中伏马毒素含量建立剂量效应曲线(或直接用OD值与标准的浓度构建剂量效应曲线)。通过在标准品曲线中添加新数值计算被测物质中伏马毒素的浓度。因为样品在处理的过程中稀释了40倍,所以在计算结果时要乘以稀释倍数40。样品和标准的对应关系如下表:

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