941OCH01M
（请以英文为准中文仅供参考）
概述
赭曲毒素-a是由黄曲霉、青霉菌、赭曲霉产生的一种有害的代谢毒物，是一种肾毒素和致癌物。在食品和饲料中经常检测到赭曲毒素-a，但主要是谷物类产品。人如果长期接触赭曲毒素a，将导致患一种肾系统肿瘤相关性疾病。动物长期接触赭曲毒素a的后果也很严重，有报道称接触赭曲毒素a的猪发生了肾功能损伤，接触赭曲毒素a的火鸡和鸡生长发育不良、发生肾病，绝食、产蛋量和蛋壳质量下降甚至死亡。
适用
Helica 公司赭曲毒素a检测试剂盒的原理是竞争酶联免疫法，用于定量检测谷物、加工过的谷类食物、咖啡和其它动物饲料中的赭曲毒素a。
原理
Helica™ 公司赭曲毒素a测定法是一个固相直接竞争酶联免疫测定法。把赭曲毒素a特异性抗体包被在聚苯乙烯微孔底部。利用70%甲醇提取样品中的赭曲毒素a，然后把提取的样品和辣根过氧化物酶标记的赭曲毒素a结合物加入到包被有抗体的微孔中。样品中的赭曲毒素a和辣根过氧化物酶结合物竞争与包被的抗体结合。轻轻倒出微孔中的内容物并洗孔，加入酶作用底物TMB显蓝色，颜色的深度和结合物的数量程正比，和样品或标准中的赭曲毒素a成反比。
因此，当样品或标准中的赭曲毒素a的量增加时，蓝色的深度降低。加入酸性终止液使微孔中的颜色从蓝色变为黄色。在OD450条件下下测定其吸光度，样品的吸光度和试剂盒中标准的吸光度进行比较 ，测定出结果。
试剂盒组成
1. 真空包装微孔板：（12×8）包被有赭曲毒素a抗体
2．预混板：（12×8条）
3．标准：赭曲毒素a标准，六瓶，每瓶1.5ml，浓度为0.0、0.4、1.0、2.0、4.0、8.0 ng/mL
4．酶结合物： HRP标记的赭曲毒素a 结合物，2瓶，每瓶12ml
5．底物溶液(TMB)：1瓶，15 mL
6．终止液：1瓶，15 mL
样品提取步骤
注意：样品必须根据已经建立的采样技术进行。
1.配制提取液(70%甲醇)，70mL甲醇溶于30mL的去离子水中（每个样品）
2. 研磨样品（能使50%的样品通过20目的滤网）
3. 称20 g 过滤的样品加入 100 mL 提取液（70%甲醇），稀释倍数1：5
4. 混匀至少3min.
5. 使用滤纸过滤5-10mL上一步处理的液体，允许颗粒物沉淀下去。收集滤液待测
测定步骤
注意：推荐使用多道移液枪，如果使用单道移液器时检测的样品不应该超过16个样品。
1、使用前将试剂拿到室温。
2、将装试剂的小袋开封，根据待测的标准品和样品的数量取出一定量的微孔。同时取出相同数量的没有包被抗体的预混板。
3、将不使用的微孔重新放入小袋，封好口避免潮湿的空气进入。（分析检测完毕微孔支架将来可以继续使用。）
4、在每个预混板微孔中加入200ul酶结合物。
5、然后再在预混板对应的微孔中加入100ul标准或样品，用移器混匀3次
注意：操作者必须标准清楚每个孔是什么
6、转移预混板微孔中的液体到对应的包被有抗体的微孔中，室温孵育15分
7、将孔里的液体倒入合适的容器中，从洗瓶里吸取去离子水洗板或用多道洗板洗孔，然后迅速弃掉洗液到合适的容器中，重复洗5次。在一层厚的吸水纸上拍板，去掉残留的洗液。
8、在吸水纸上拍打，尽可能地将水拍干。
10、每个孔中加入100μL 酶反应底物（TMB），室温孵育5min。
12、加入100μL的终止液终止反应，板中颜色将会由蓝色变为棕黄色。
13、450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD），并记录读数。
结果分析
使用原有的OD值或实验获得的OD值与标准曲线中赭曲毒素-a浓度为0时OD值的百分比值与标准中赭曲毒素-a含量建立剂量效应曲线。通过在标准品曲线中添加新数值计算被测物质中赭曲毒素-a的浓度。标准曲线的范围是2 ppb 到 40 ppb，如果样品的浓度大于40ppb，需要用70%甲醇稀释后再测定，计算结果时要考虑到稀释的倍数。
