谷物中赭曲毒素-A检测试剂盒

上一篇 / 下一篇  2010-07-14 16:29:27

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941OCH01M

(请以英文为准中文仅供参考)

概述   

赭曲毒素-a是由黄曲霉、青霉菌、赭曲霉产生的一种有害的代谢毒物,是一种肾毒素和致癌物。在食品和饲料中经常检测到赭曲毒素-a,主要是谷物类产品。人如果长期接触赭曲毒素a将导致患一种肾系统肿瘤相关性疾病。动物长期接触赭曲毒素a的后果也很严重,有报道称接触赭曲毒素a的猪发生了肾功能损伤,接触赭曲毒素a的火鸡和鸡生长发育不良、发生肾病,绝食、产蛋量和蛋壳质量下降甚至死亡。

适用

Helica公司曲毒素a检测试剂盒的原理是竞争酶联免疫法,用于定量检测谷物、加工过的谷类食物、咖啡和其它动物饲料中的曲毒素a

原理

Helica™公司曲毒素a测定法是一个固相直接竞争酶联免疫测定法。把曲毒素a特异性抗体包被在聚苯乙烯微孔底部。利用70%甲醇提取样品中的赭曲毒素a,然后把提取的样品和辣根过氧化物酶标记的赭曲毒素a结合物加入到包被有抗体的微孔中。样品中的曲毒素a辣根过氧化物酶结合物竞争与包被的抗体结合。轻轻倒出微孔中的内容物并洗孔,加入酶作用底物TMB显蓝色,颜色的深度和结合物的数量程正比,和样品或标准中的赭曲毒素a成反比。

因此,当样品或标准中的曲毒素a的量增加时,蓝色的深度降低。加入酸性终止液使微孔中的颜色从蓝色变为黄色。在OD450条件下下测定其吸光度,样品的吸光度和试剂盒中标准的吸光度进行比较,测定出结果。

试剂盒组成

1.真空包装微孔板:(12×8)包被有赭曲毒素a抗体

2.预混板:(12×8条)

3.标准:赭曲毒素a标准,六瓶,每瓶1.5ml,浓度为0.00.41.02.04.08.0 ng/mL

4.酶结合物:HRP标记的赭曲毒素a结合物,2,每瓶12ml

5.底物溶液(TMB)1瓶,15 mL

6.终止液:1瓶,15 mL

样品提取步骤

注意:样品必须根据已经建立的采样技术进行。

1.配制提取液(70%甲醇)70mL甲醇溶于30mL的去离子水中(每个样品)

2.研磨样品能使50%的样品通过20目的滤网)

3.20 g过滤的样品加入100 mL提取液(70%甲醇),稀释倍数1:5

4.混匀至少3min.

5.使用滤纸过滤5-10mL上一步处理的液体,允许颗粒物沉淀下去。收集滤液待测

测定步骤

注意:推荐使用多道移液枪,如果使用单道移液器时检测的样品不应该超过16个样品。

1、使用前将试剂拿到室温。

2、将装试剂的小袋开封,根据待测的标准品和样品的数量取出一定量的微孔。同时取出相同数量的没有包被抗体的预混板。

3、将不使用的微孔重新放入小袋,封好口避免潮湿的空气进入。(分析检测完毕微孔支架将来可以继续使用。)

4、在每个预混板微孔中加入200ul酶结合物。

5、然后再在预混板对应的微孔中加入100ul标准或样品,用移器混匀3

  注意:操作者必须标准清楚每个孔是什么

6、转移预混板微孔中的液体到对应的包被有抗体的微孔中,室温孵育15

7、将孔里的液体倒入合适的容器中,从洗瓶里吸取去离子水洗板或用多道洗板洗孔,然后迅速弃掉洗液到合适的容器中,重复洗5次。在一层厚的吸水纸上拍板,去掉残留的洗液。

8、在吸水纸上拍打,尽可能地将水拍干

10、每个孔中加入100μL酶反应底物(TMB),室温孵育5min

12、加入100μL的终止液终止反应,板中颜色将会由蓝色变为棕黄色。

13450nm下读取每个孔的吸光度值(OD),并记录读数。

结果分析

使用原有的OD值或实验获得的OD值与标准曲线中赭曲毒素-a浓度为0OD值的百分比值与标准中赭曲毒素-a含量建立剂量效应曲线。通过在标准品曲线中添加新数值计算被测物质中赭曲毒素-a的浓度。标准曲线的范围是2 ppb40 ppb,如果样品的浓度大于40ppb,需要用70%甲醇稀释后再测定,计算结果时要考虑到稀释的倍数。

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