CRO方案：四极杆和TOF液质联用上进行合成药物中的杂质识别

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Mass Works 技 术 专 题

本文利用了Agilent LC-MSD结合massworks对合成药物中的杂质进行了准确的识别

仪器：
Agilent LC-MSD，Agilent LC-TOF
MassWorks软件

分析方法：

1）杂质提取物与内标物（C₁₂H₁₃N₃，m/z 199）混合，利用Agilent LC-MSD进行色谱分离和质谱检测，Chemstation在Profile模式下进行数据采集，MassWorks对采集数据进行校正、分析杂质（m/z 241）的分子式。

2）杂质提取物利用Agilent LC-TOF进行色谱分离和质谱检测，MassHunter在Profile模式下进行数据采集，MassWorks对采集数据进行校正、分析杂质（m/z 241）的分子式。

结果与讨论：


      利用内标物（C₁₂H₁₃N₃，m/z 199）作为MassWorks的校正标样，对杂质（m/z 241）的平均质谱峰进行校正，并利用MassWorks内置的CLIPS（校正的线性同位素轮廓搜索）进行分子式检索，得到候选分子式如表1所示。

      在搜索结果中排名第一位的C₁₃H₁₆N₅（C₁₃H₁₅N₅的加氢离子）校正后的质量精度虽然只有18 mDa，但它具有99.75%的最高谱图准确度。

      图2为杂质校正后的轮廓质谱图与排在第一位的C₁₃H₁₆N₅理论质谱图的叠加比较结果，可见具有很好的匹配结果。


      MassWorks可以不需校准物校正，直接对TOF等高分辨质谱数据进行分析。表2为MassWorks校正后，利用sCLIPS（自校正线性谱图同位素轮廓搜索）搜索得到待选分子式列表。可见利用MassWorks校正后，TOF得到了与LC-MSD相似的结果。虽然具有约8 ppm的质量精度（C₁₂H₂₀O₄N 具有更小的2ppm的质量精度），但C₁₃H₁₆N₅具有最高的谱图准确度，但其具有最高的谱图准确度，所以排在待选列表的第一位。

      杂质随后利用核磁等分析工具进一步分析后，确认为C₁₃H₁₆N₅，与MassWorks的分析结果完全吻合，所以，TOF仪器并不能给出正确的分析结果（排序第一的是C₁₂H₂₀O₄N ），质量精度不能提供可靠的识别工具，而谱图准确度相对质量精度是更可靠的分子识别手段。


结论：

• 利用MassWorks在单位质量分辨的四极杆LC-MS实现了合成药物中的杂质识别
• 不要标准物校正，MassWorks可以对高分辨的TOF仪器得到的数据进行校正，进行分子式识别
• TOF仪器的高质量精度，并不能实现分子式的正确识别
• TOF仪器的高质量精度，结合MassWorks的同位素轮廓校正技术，利用谱图准确度实现了未知物的正确识别。