呕吐毒素检测试剂盒

适用

呕吐毒素检测试剂盒的原理是竞争ELISA，用于定量检测小麦、大麦、玉米和燕麦产品中的呕吐毒素的含量。

原理

本试剂盒原理是竞争酶联免疫检测方法，利用水溶液通过震荡从样品中提取呕吐毒素。然后过滤提取液待测。在固相载体微孔板中加入标准和处理的样品，然后加入呕吐毒素酶标记物，再加入呕吐毒素抗体引发反应。孵育10分，样品中的呕吐毒素和酶标呕吐毒素竞争于呕吐毒素抗体反应，呕吐毒素抗体和微孔结合。洗板除去没有反应的试剂。加入底物显色剂、无色的显色剂转化为蓝色的产物；反应5min加入反应终止液终止反应后使颜色由蓝色变为黄色；在450nm波长进行检测，样品中的呕吐毒素浓度与吸收光强度成反比。把未知样品的吸光度值和标准的吸光度值比较可以计算出样品中呕吐毒素的含量。

特异性

Abraxis DON毒素试剂盒使用的抗体对呕吐毒素是很特异的，下表是抗体和呕吐毒素类似物质的反应情况

试剂盒组成

试剂盒保存在2-8摄氏度。在有效期内都可以使用

1、96孔酶标板：1块（12×8条）。
\F~2@'y%X3J7B02、标准液（Standard）: 5瓶（2ml/瓶），浓度分别为0, 0.2, 0.5, 1.0 and 2.5 μg/mL (ppm) （注意：因为谷物样品在萃取过程中1：5倍稀释，标准品实际上为设定标准浓度的1/5，所以原样品的浓度无需校正）。

3、HRP酶标记物：1瓶（8ml）HRP标记的呕吐毒素酶结合物

4、鼠抗呕吐毒素抗体：1瓶（8ml）

5、底物显色液：1瓶（12ml）

6、终止液：1瓶（12ml 、1N HCl）。

7、洗液(5X)：1瓶（100 mL）使用时需要1：5倍的稀释。

8、使用说明书

操作步骤

注意：标准和样品做平行可以增加精密度和准确度

1、使用前将试剂盒和样品处理液提前从冰箱中拿出来使其恢复到室温。

2、从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。

3、每个测试孔都加入50 μL酶结合物

4、在对应的微孔中加入50μL的标准和样品，确保吸头要干净。

5、每个测试孔都加入50 μL抗体溶液

6、孵育10分钟

7、孵育完成后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用自来水加满微孔然后倒掉，重复四次，总共五次洗板。

8、最后一次洗板后要拍板，去掉残留的洗液。

9、每个测试孔加入100μL底物。

10、孵育5分钟

11、每个测试孔加入100μL终止液。

12、450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）。

结果分析

1． 半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的呕吐毒素含量大于此标准的浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的呕吐毒素含量小于此标准的浓度。

2． 定量结果判定，需要以标准的吸光度值为X轴，标准浓度的对数为Y轴绘制曲线图，将标准浓度吸光度值的点用直线连接，样品的吸光度值也位于这条直线上，根据样品的吸光度值在Y轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光度值大于最小标准的吸光度值或小于最大标准的吸光度值，即可说明此样品中呕吐毒素的含量小于0.2ppm或大于2.5ppm。