有关物质方法验证(HPLC)

上一篇 / 下一篇  2010-09-10 08:16:53

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最近在做原料药的有关物质方法验证,小弟是头一次搞这个东西,有很多问题都不大明白,特向各位老师请教。有些问题请不要见笑。。。。
有关物质采用的HPLC方法
岛津的液相10AT
流动相:0.05mol/L的磷酸二氢钠(PH=3):甲醇:乙腈=90:6:4
柱子:C18
流速:0.8ml/min
检测波长:210nm
进样量:20ul
问题
1、在进行检测时,空白在2.8-3.1分钟之间有一个很小的峰(峰高大概是0.07mv,想忽略不计可是他毕竟占一定的峰面积啊)。不知道是什么原因,
2、此空白峰出峰时间和我们样品的一个杂质(丙氨酸)出峰时间正好重叠,而且峰形不好,达不到注册要求的(对称性和分离度),但主峰符合要求。

[本帖最后由 zhangyandong4 于 2010-9-3 08:11 编辑]

样品.JPG


空白.JPG

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ttkl533 ttkl533 发布于2010-09-02 17:59:59
调整分析方法~

2.8min左右一般是进样后系统死体积造成的波动,所以你在空白里也能看到。
另外,你的检测波长是210,接近甲醇等的末端吸收,所以基线会比较难看。
HEC_css HEC_css 发布于2010-09-02 18:02:10
空白峰不就是溶剂峰吗?溶剂和流动相是一样的吗?
检测波长选在210nm,甲醇的末端吸收在205nm,应该也有一定的影响吧
unknow unknow 发布于2010-09-02 18:13:05
回复 #1 zhangyandong4 的帖子
空白出峰只能是溶剂峰了。

如果丙氨酸是需要控制的杂质,
1、有其他方法进行控制,那液相有关物质检查这项就可以不包括它,不必积分
2、没有其他方法控制,就需调整流动相比例(增加水的比例),使其跟溶剂峰分开,再积分。
NVIDIA NVIDIA 发布于2010-09-02 20:31:58
请问你的空白是打一针溶剂还是直接inject?
饮食男女 饮食男女 发布于2010-09-02 20:32:23
1。进一针流动相,看看那个峰是从哪里来的?

2。那个杂质是不是你们需要控制的?如果不需要控制,那就可以不管;如果要控制,那就要重选方法了
zhangyandong4 zhangyandong4 发布于2010-09-03 07:37:17
回复 #3 HEC_css 的帖子
我用的就是流动相溶的,进的空白溶剂就是流动相。
zhangyandong4 zhangyandong4 发布于2010-09-03 07:42:01
回复 #6 饮食男女 的帖子
此肯定需要控制的,含量还不小,国家药典有用薄层色谱方法控制,但是小弟不大熟练那个分析方法,而且即使将此杂质分开来测,那么在检测杂质总量的时候它是无法定量的,所以它影响杂质的总量。小弟有点笨,希望老师给与指导,谢谢。
zhangyandong4 zhangyandong4 发布于2010-09-03 07:43:01
回复 #5 NVIDIA 的帖子
我们的空白溶剂是流动相,直接进的流动相。
zhangyandong4 zhangyandong4 发布于2010-09-03 07:46:12
回复 #4 unknow 的帖子
1、药典上有薄层色谱的方法进行控制,但是有关物质需要知道总量,因为丙氨酸的含量无法定量,所以总量是很影响的。指导法则杂质的总量不能超过2%,而药典的对丙氨酸的控制为1%以下。
2、流动相的水和有机溶剂的比例,我调试过了,丙氨酸的峰始终在2.8-3.1之间,很让我崩溃。
希望老师指导。

[ 本帖最后由 zhangyandong4 于 2010-9-3 07:49 编辑 ]
zhangyandong4 zhangyandong4 发布于2010-09-03 08:14:50
上传两张图片,这样更加明了,谢谢老师的回复。
header header 发布于2010-09-03 10:17:34
甲醇的溶剂峰
liuzhangwee liuzhangwee 发布于2010-09-03 10:18:46
柱子有多长?有没有可能是溶剂?
zhangyandong4 zhangyandong4 发布于2010-09-03 11:01:29
回复 #12 header 的帖子
进流动相按理能消除此峰的,请问有没有办法消除这个峰啊。
zhangyandong4 zhangyandong4 发布于2010-09-03 11:02:50
回复 #13 liuzhangwee 的帖子
250㎜*4.6㎜  5um
Erica2088wr Erica2088wr 发布于2010-09-03 11:09:09
流动相比例改变下试试看!
DragonsABC DragonsABC 发布于2010-09-03 11:10:36
可以进一个空白的溶剂(就是不加你的主产物),然后用机器自带的软件把这个空白的溶剂峰消掉试试
zhangyandong4 zhangyandong4 发布于2010-09-03 11:17:07
回复 #16 Erica2088wr 的帖子
流动相比例改过了,很多比例都试过。还是不行。。。。。
zhangyandong4 zhangyandong4 发布于2010-09-03 11:18:24
回复 #17 DragonsABC 的帖子
这样操作可以吗?不知道那种液相能消除空白溶剂的峰啊。。。。。
LUMGR LUMGR 发布于2010-09-03 11:24:22
你想解决的问题是什么?
我感觉是否流动相被丙氨酸污染了
zhangyandong4 zhangyandong4 发布于2010-09-03 11:53:40
回复 #20 LUMGR 的帖子
进流动相时不出峰  
或者丙氨酸的出峰时间不和此峰重叠就行。
我来说两句

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