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固相萃取-高效液相色谱法测定水中邻苯二甲酸二甲酯和双酚A
注明：此方法由博纳艾杰尔提供www.agela.com.cn
1 前言
邻苯二甲酸酯（DEHP）是一种被广泛使用的增塑剂，用DEHP代替棕榈油配制的有毒起云剂能产生和乳化剂相似的增稠效果。但是，DEHP作为塑化剂并不属于食品香料原料，DEHP不仅不能被添加在食物中，甚至不允许使用在食品包装上。DEHP的作用类似于人工荷尔蒙，会损害男性生殖能力并促使女性性早熟，长期大量摄取会导致肝癌。由于幼儿正处于内分泌系统生殖系统发育期，DEHP对幼儿带来的潜在危害会更大。
邻苯二甲酸二甲酯属于邻苯二甲酸酯类物质，也是这次起云剂中的违法有毒添加物。
双酚A，也称BPA，用来生产防碎塑料，工业上又叫作聚碳酸酯。BPA无处不在，从矿泉水瓶、医疗器械到及食品包装的内里，都有它的身影。但BPA也能导致内分泌失调，威胁着胎儿和儿童的健康。癌症和新陈代谢紊乱导致的肥胖也被认为与此有关。欧盟认为含双酚A奶瓶会诱发性早熟，从2011年3月2日起，禁止含生产化学物质双酚A(BPA)的婴儿奶瓶。
因此饮料中的邻苯二甲酯类物质和双酚A的检测迫在眉睫。目前，国内邻苯二甲酸二甲酯和双酚A的检测主要用GC-MS检测，有关液相色谱检测的报道甚少。本文建立的相萃取-高效液相色谱法测定水中邻苯二甲酸二甲酯和双酚。为其检测探寻了新的思路。
2 实验部分
2.1 仪器和试剂
高效液相色谱仪：Agilent 110；
色谱柱：Venusil ASB-C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm，150 Å 订货号：VS951505-0)、
Cleanert PEP固相萃取柱（500mg/6mL，订货号：PE5006）、
0.45μm尼龙针式滤膜、0.45μm混合纤维素滤膜、
固相萃取装置、样品浓缩氮吹仪（天津博纳艾杰尔科技有限公司）
甲醇，乙腈：色谱纯；其余试剂均为分析纯。
2.2实验步骤
2.2.1 标液配制
邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、双酚A（BPA）标准品分别用甲醇溶解，配制成200μg/mL的标准储备液。用40%乙腈水逐级稀释成1.0、2.0、4.0、10、20μg/mL的系列标准溶液。
2.2.2 水样处理
水样(PH在2~11)，过0.45μm混合纤维素滤膜除去悬浮微粒。
2.2.3 SPE前处理方法
取250 mL处理好的水样，以自然流速过Cleanert PEP 固相萃取柱（5mL甲醇，5mL水活化好），用5mL纯水淋洗柱子，真空抽干1min，用5 mL甲醇洗脱并收集。洗脱液在35℃下经氮气缓慢吹至近干，用流动相溶解定容至2mL，过滤待测。
2.3 分析条件
色谱柱：Venusil ASB-C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm，150 Å)
流动相：V(乙腈 ）：V(水)=40:60
流速：1.0 mL/min
柱温：30℃
检测波长：230nm
进样量：20μL
3 结果与讨论
3.1 标准曲线
40%乙腈水稀释的1.0、2.0、4.0、10、20μg/mL的系列标准溶液，进行检测分析。图1为1.0 μg/mL DMP、BPA混合标液谱图。在线性范围1.0～20μg/mL范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系，DMP、BPA的回归方程分别为y=49.9395x+0.6333(R2=1.0000)、 y=100.7213x+0.5782(R2=1.0000)，见图2。
图1 1.0 μg/mLDMP、BPA混合标液谱图
图2 DMP、BPA线性关系图
3.2不同pH值的水样加标实验
水样取3份，各250 mL，用磷酸、氨水调节水样pH为2、7、11，分别加入20μg/mL 的BPA、DMP 混合标液0.50、0.50、0.40mL，进行加标回收实验。结果见表1。结果表明，pH值在2~11，回收率均大于80%。方法可适用于pH2~11的水。
表1 不同pH，不同体积水样的回收情况
|
水样
pH值 |
DMP |
BPA | ||||
|
理论浓度值(μg/mL) |
实际检测值(μg/mL) |
回收率(%) |
理论浓度值（μg/mL） |
实际检测值（μg/mL） |
回收率（%） | |
|
2.0 |
5.0 |
4.591 |
91.8 |
5.0 |
4.801 |
96.0 |
|
7.2 |
5.0 |
4.279 |
85.6 |
5.0 |
4.765 |
95.3 |
|
11.0 |
4.0 |
3.567 |
89.1 |
4.0 |
3.972 |
99.3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
3.3 纯水与纯水加标回收率实验
取纯水（测得pH=9.0）5份各250mL，1份做空白，其他4份做两组平行试验，分别加入20μg/mL 的BPA、DMP 混合标液混合标液0.10、0.40mL，相当于添加水平为8.0μg/L、32μg/L ，按方法进行实验。回收率见表1，谱图见图3，图4，图5。
表2 加标回收率
|
样液 |
理论浓度值(μg/mL) |
实际检测值（μg/mL） |
回收率（%） |
|
DMP |
1.0 |
0.861 |
86.1 |
|
1.0 |
0.847 |
84.7 | |
|
4.0 |
3.377 |
84.4 | |
|
4.0 |
3.348 |
83.7 | |
|
BPA |
1.0 |
0.891 |
89.1 |
|
1.0 |
0.888 |
88.8 | |
|
4.0 |
3.687 |
92.2 | |
|
4.0 |
3.370 |
84.3 |
.jpg)
图3水样空白
图4水样加标8.0μg/L
（1：DMP 2：BPA）
图5水样加标32μg/L
（1：DMP 2：BPA）
4 结论
本文采用SPE前处理，高效液相色谱法测定水中的邻苯二甲酸二甲酯和双酚A。在实验过程中，有两点值得注意：
（1）邻苯二甲酸二甲酯常温下液态，洗脱液用氮气吹时须注意不能完全吹干，否则回收率低。
（2）双酚A会与氯气反应，使双酚A带上1~4个氯。所以如果水样含有游离氯，双酚A会与水中游离氯反应生成几种氯取代物副产物，副产物保留时间和双酚A不一样，检测时可通过样品及样品加标色谱图差异加以判断。
（3）本方法可以处理更大体积水样。500mL 水样加标水平16μg/L时回收率分别为BPA 81.8%，DMP81.7 %。
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