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美国abraxis麻痹性贝类毒素(PSP)检测试剂盒

上一篇 / 下一篇  2010-11-06 11:38:55 / 个人分类:检测试剂盒

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美国abraxis麻痹性贝类毒素(PSP)检测试剂盒

PN 52255B

1.概述

本检测采用酶联免疫法定量检测麻痹性贝类毒素的存在。神经性贝毒是一种毒素,石房蛤毒素是麻痹性贝类毒素的一种。本检测可用于水产样本对贝类毒素的定性和定量检测,例如甲壳类动物的样本。对于甲壳类动物的需要提前制备样本。如果条件允许,阳性样本可以做HPLCGC/MS或其他方法确认。

2.安全性说明

标准品溶液含有少量的石房蛤毒素。底物溶液含有四甲基联苯胺,终止液还有稀硫酸。避免皮肤与粘膜与终止液接触。若终止液与皮肤接触,可用水洗去。

3.贮藏与稳定性

试剂盒贮存在4-8°C。使用前试剂盒中溶液要恢复到室温(20—25度)。在保质期内试剂盒都可以正常使用。

4.检测原理

本实验采用直接竞争ELISA方法,用特异性抗体识别石房蛤毒素。样本中的石房蛤毒素可与石房蛤毒素-酶结合物竞争,同包被在微孔板上的兔抗-石房蛤毒素抗体结合。石房蛤毒素抗体与包被在微孔底部的二抗结合。洗板后加入底物溶液,显蓝色。蓝色的深度与石房蛤毒素在样本中的浓度成反比。颜色反应在规定时间内终止,颜色用酶标仪读值。每孔的样本浓度值可以通过标准曲线来读取。

A.试剂盒组成

1.真空包装微孔板12×8条),包被一种羊抗兔二抗

2.标准液(6):0, 0.02, 0.05, 0.1,0.20.4 ng/mL (ppb)

316mL抗体(兔抗石房蛤毒素抗体)

416mL石房蛤毒素-HRP酶标记物

5225ml样品稀释缓冲液(10倍浓缩)(即用即配,例如:10ml浓缩缓冲液+90ml蒸馏水)

61100ml洗板缓冲液(5倍浓缩) (即用即配,例如:10ml浓缩缓冲液+40ml蒸馏水)

7112 mL底物(显色液TMB

8112mL终止液

C.操作步骤

1、在对应的微孔中加入50μL的标准和样品(推荐做2-3个重复)

2、每个测试孔都加入50 μL石房蛤毒素酶标记物溶液。

3、每个测试孔都加入50 μL石房蛤毒素抗体溶液,用封口膜把微孔板盖上,轻轻的震荡微孔板30秒使里面的液体混匀。不要使液体洒出。

4、在室温下孵育30分钟。

5孵育完成后,把封口膜取掉,将微孔中的溶液用力地倒入水槽中,用1X的洗液洗板3次,每孔每次至少加入250 μL1X的洗液。拍板,去掉残留的洗液。

6、每个测试孔加入100μL的显色液(底物)。封口膜把微孔板盖上,轻轻的震荡微孔板30秒使里面的液体混匀。不要使液体洒出。室温孵育20-30分钟,此步骤避免太阳光照射。

7、每个测试孔加入100μL终止液。

8、用酶标仪在450nm下读取每个孔的吸光度值(OD)(在加入终止液15分钟内完成)。

D结果分析

结果分析可以利用商业ELISA分析软件(4-parameters,Logit/Log)。手工计算可以先计算标准的吸光度值的平均值,然后计算每个标准的%B/B0(用其它标准的吸光度值除以零标准的吸光度值乘以100%)。以每个标准的%B/B0Y轴,以每个标准的石房蛤毒素的浓度做X轴构建标准曲线。通过利用标准曲线,把样品的%B/B0代入标准可以计算出样品中冈田酸的浓度。样品中石房蛤毒素的含量小于0.02 ppb认为阴性。当样品中石房蛤毒素的含量大于0.4 ppb要稀释后再测定

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