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各款荧光定量PCR仪的性能比较

上一篇 / 下一篇  2011-02-23 10:46:20

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  本人从事荧光定量PCR检测试剂的开发工作,用过市场上主流的多款荧光定量PCR仪,如 ABI5700,ABI7700,ABI7000,ABI7300,ABI7500,MJ opticon,MJ opticon2,bio-rad ICycler,LightCycler1.5,roter-gene3000,line-gene等等。这种仪器各有各的特点,但都存在不足之处。

  总的来说,ABI公司的荧光定量PCR仪产品比较多,成系列,但目前而言ABI5700和ABI7700不能实时在线地检测荧光,因而已经退出历史舞台,尤其是ABI7700,不但很贵,而且采用苹果机电脑,使用很不方便。ABI7000目前也已经淘汰,我用的这台仪器老出问题,曲线极不光滑,但同样的体系在国内机line-gene上曲线非常好,在ABI7500上曲线也很光滑,所以,本人估计是 ABI7000设计上有不足之处。现在市场上的ABI7300就是ABI7000的简单升级版,硬件设计上几乎没有改变,只是换过几个性能更好的配件,软件有所升级。不过我个人认为ABI7300和7500的软件有美化曲线之嫌,因为我有一次在ABI7000上做的很不好的文件,在ABI7500上打开时,曲线竟然变光滑了,而在者之前,在ABI7000上曲线很曲析不平的。另外我个人感觉ABI7900(ABI公司第二代产品)有些华而不实,价格应该是所有荧光定量PCR仪中最贵的,但性能指标还不如ABI7500(ABI公司第三代产品),硬件设计上也不如ABI7500合理。

  总的来说,ABI公司在荧光定量领域上还是做出很多贡献的,其仪器在科研上还是可以用的,但由于硬件设计上的缺陷,需要额外的ROX染料进行校正,并且占用了一个检测通道。国内的试剂厂商都不加ROX染料,科研用户一般也不使用,所以其检测的准确性和重复性还是很难保证的,尤其浓度较低的模板进行检测时效果不佳,偏差会很大。

  罗氏的LightCycler以运行速度快而著称,在国内市场占有率最高,但本人最初使用时老出问题,有时候阳性曲线做不出来,后来发现这跟其独特的毛细管设计有关系,因为毛细管很细,所以反应液在毛细管中的交换对流非常不畅,反应液在低温是蛋白会以结晶状态析出,没有充分混匀时就加入毛细管会影响反应的进行,热启动酶不会受影响。所以本人在操作时都特意将反应液混合充分后再加入毛细管,这样实验就比较正常了。

  本人开始使用罗氏的仪器时最怕毛细管断裂,操作时特别担心,熟悉以后,规范使用随机赠送的操作配件,毛细管也就没断过。而且最重要的是,罗氏的仪器稳定性非常好,灵敏度明显比其它仪器高,这也许跟毛细管和其检测元件有关系,检测重复性也非常好,所得定量结果可信度高。本人所使用的罗氏LightCycler1.5三四年了也没出现硬件的故障。

  罗氏公司推出的LightCycler2.0在原有基础上检测通道增加到六个,软件功能也更加丰富。据说最新推出的LightCycler480是目前全球最先进的荧光定量PCR仪,突破了传统技术的瓶颈,推出了不具边缘效应的高通量荧光定量PCR仪。具体没有用过,听说使用非常灵活。

  MJ的仪器总体上而言比较稳定,但检测灵敏度不高,功能单一,检测通道不多,运行时间太长。

  伯乐的ICycler仪器也许是设计上的缺陷还是什么原因,同样的反应体系,在该仪器上进行实验时,阳性样本的扩增曲线荧光增量比较低,检测效果不好,所以在全国很少用户使用该仪器。

  Line-gene仪器的使用比较方便,但返修率较高,不过厂家就在国内,售后服务非常及时。

  roter-gene3000跟罗氏公司的LightCycler有很多相似之处,只是roter- gene在操作时比较麻烦,而且采用普遍反应管,光透性不好,影响了检测结果,这可以从其原始曲线上看出来,但该仪器的软件所表现的是对数曲线,把其原始曲线上的曲析不平掩盖了,其灵敏度不高。


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引用 删除 叶明奇   /   2012-11-22 09:35:10
你好,我是这今年开始做荧光PCR,看了你对当前的PCR仪分析颇有见解,你里面提到的罗氏LC480的也会用到,现在LC480不使用毛细管,改换96孔板跟八连管,也通过光学的改变不具边缘效应。
 

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