人可溶性CD21(CD21)ELISA 试剂盒说明书

上一篇 / 下一篇  2011-03-17 14:14:53 / 个人分类:ELISA试剂盒说明

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实验原理

人可溶性CD21(CD21)ELISA 试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人可溶性CD21CD21水平。用纯化的人可溶性CD21CD21抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入可溶性CD21CD21),再与HRP标记的可溶性CD21CD21抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的可溶性CD21CD21呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人可溶性CD21CD21浓度。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

标准品(24IU/L

0.5ml×1

3

酶标包被板

12孔×8

9

标准品稀释液

1.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

1

5

显色剂A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

显色剂B

6ml×1/

12

密封袋

1

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1.        标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

12U/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

6U/L

4号标准品

150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

3U/L

3号标准品

150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

1.5U/L

2号标准品

150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

0.75U/L

1号标准品

150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

 

2.        加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.        温育:用封板膜封板后置37温育30分钟。  

4.        配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.        洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.        加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.        温育:操作同3

8.        洗涤:操作同5

9.        显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.

10.    终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.    测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

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  • 更新时间: 2011-03-18

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