嗜水气单胞菌外膜蛋白W基因的表达及其免疫原性分析

嗜水气单胞菌外膜蛋白W基因的表达及其免疫原性分析
刘明智1,2  叶星1*  田园园1  马冬梅1  张莉莉1  迟妍妍1,2  邓国成1
(1. 中国水产科学研究院珠江水产研究所  广东 广州  510380)
(2. 上海海洋大学  上海  201306)

摘  要: 从患暴发性败血病的草鱼病灶处分离鉴定了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) Wp3菌株。以其基因组DNA为模板扩增外膜蛋白W基因(OmpW), 该基因全长为865 bp, 开放式阅读框(ORF)为615 bp, 与标准株ATCC7966的OmpW基因的同源性为99.8%。根据ORF序列设计引物扩增OmpW成熟肽编码序列并将其插入到表达载体pQE30中, 转化大肠杆菌, 经诱导可表达分子量为24.7 kD的带His标签的融合外膜蛋白His-W。用此融合蛋白免疫草鱼, 所得草鱼血清经ELISA分析显示呈现阳性反应, 说明重组蛋白能诱导产生抗体。采用实时荧光定量PCR分析草鱼头肾组织IgM基因表达水平的变化, 结果显示免疫组IgM的表达量均明显高于空白组, 其中低浓度免疫组(2 μg/g)与空白对照组的差异显著(P<0.05), 说明融合蛋白可使草鱼产生良好的免疫应答并上调抗体基因表达、产生高效抗体。保护性实验显示, 不同免疫剂量均可使免疫组获得较高保护率(57%?86%)。结果显示, 重组嗜水气单胞菌外膜蛋白W可作为草鱼嗜水气单胞菌基因工程亚单位疫苗。

关键词: 嗜水气单胞菌, 外膜蛋白W, 克隆, 基因工程表达, 免疫原性, IgM, 保护率