液相色谱方法开发

液相色谱方法开发

液相色谱适合80%化合物的测定，按照检测器可检测化合物的范围，如紫外检测器可检测含共轭结构的化合物，如含苯环，共轭双键，杂环等具紫外吸收的化合物。示差检测器可检测所有的化合物，是通用型检测器，原理是化合物折光率的不同。荧光检测器可以检测能产生荧光的物质。现在的紫外检测器一般扩展到可见部分，对于有颜色的物质可以按照吸收波长进行检测。蒸发光散射也是通用型检测器，通过去溶剂，按照固体对光的散射不同进行检测。还有就是质谱检测器和其他比较特殊的检测器。

在一台LC/DAD上如何开发方法呢。

步骤可以是这样：

1.       化合物性质，明确正向，反相和溶剂。

2.       柱子，C18柱还是极性稍强的CN柱，氨基柱等。

3.       流动相，如果是反相，水乙腈体系最好，按照化合物性质调Ph值或加盐，如果方法需要移植到MS上，只能加挥发性盐类，如乙酸铵等。

4.       设定梯度，可以是有机相从5%-100%在30分钟内走完，保持20分钟，应该可以使全部的峰流出。

5.       DAD可设定采集光谱254，210nm，采集全波长光谱图（3D）。

6.       按照梯度洗脱的结果，优化洗脱程序。

7.       按照全波长谱图设定化合物检测波长。