东曹G3000SWxl在抗体分离中的应用举例

No. Bio-012

抗体的 Fab 片段化是一种提高抗体穿透性、减少对 ELISA 的非特异性吸附以及获得其他多种目的而被广泛采用的方法。对于 Fab 片段的制备，木瓜蛋白酶的使用非常普遍。本数据中介绍了一款特别适合于蛋白分析的 TSKgel G3000SW XL 分子尺寸排阻色谱柱，对使用木瓜蛋白酶进行老鼠单克隆抗体 lgG1 酶切/消化时，单抗随时间变化情况的分析应用。


色谱条件
色谱柱: TSKgel G3000SW XL  (7.8mmI.D. x 30cm)
流动相: 20mmol/L Phosphate + 0.3mol/L NaCl (pH7.0)
流速: 1.0mL/min
检测: UV (280nm)
温度: 25C
进样体积: 20μL
样品浓度: 0.22g/L
液相色谱仪: Agilent 1120 Compact LC (gradient auto system)

程序：
木瓜蛋白酶酶切/消化反应是在含有 0.15mol/L NaCl、1mmol/L EDTA、25mmol/L  巯基乙醇的 10mmol/L  磷酸缓冲液(pH7.3)中，37 度的温度下进行的。
在 5g/L 的抗体溶液中加入 10%(体积比)的木瓜蛋白酶(Sigma P4762,1g/L)并孵化。
当酶切/消化反应分别进行到 2, 5, 10, 30 和 60 分钟时，取 48.5uL 的反应溶液并立刻加入 1.5uL 的 1mol/L 的碘乙酰胺以阻止酶切/消化反应继续进行。
上述 50uL 停止反应的溶液中，加入 950uL 的 20mmol/L  磷酸缓冲液+0.3mol/L NaCl(pH7.0)稀释后，进样分析。

No. Bio-013

抗体的 F(ab’)2 片段化是一种提高抗体穿透性、减少对 ELISA 的非特异性吸附以及获得其他多种目的而被广泛采用的方法。对于 F(ab’)2 片段的制备，胃蛋白酶的使用非常普遍。但不同种类或亚种类的抗体，对胃蛋白酶的敏感程度是不同的。因此，在酶切/消化反应的初期，对反应条件(如 pH 或反应时间等)进行优化是需要的。本数据中介绍了一款特别适合于蛋白分析的 TSKgel  G3000SW XL 分子尺寸排阻色谱柱，对使用胃蛋白酶进行老鼠单克隆抗体 lgG1 酶切/消化时，单抗随时间变化情况的分析应用。

色谱条件
色谱柱         : TSKgel G3000SW XL  (7.8mmI.D. x 30cm)
流动相         : 20mmol/L Phosphate + 0.3mol/L NaCl (pH7.0)
流速  : 1.0mL/min
检测  : UV (280nm)
温度  : 25C
进样体积      : 20μL
样品浓度      : 0.192g/L
液相色谱仪   : Agilent 1120 Compact LC (gradient auto system)
程序  :   
胃蛋白酶酶切/消化反应是在 0.1mol/L 的柠檬酸盐缓冲液(pH3.7)  中，37 度的温度下进行的。
在 5g/L 的抗体溶液中，加入 40 单位的胃蛋白酶(Sigma P7012,1g/L)/mg 并孵化。
当酶切/消化反应分别进行到 2, 5, 10, 30 和 60 分钟时，取 40uL 的反应溶液并立刻加入 10uL 的 3mol/L 的 Tris(羟甲基)-氨基甲烷以阻止酶切/消化反应继续进行。   
上述 50uL 停止反应的溶液中，加入 990uL 的 20mmol/L  磷酸缓冲液+0.3mol/L NaCl(pH7.0)稀释后，进样分析。


No. Bio-014

治疗性蛋白的 PEG 化是一种延长蛋白药物体内半衰期的策略。本数据中，介绍了通过混合 N-羟基琥珀酰亚胺酯衍生物(IgG:PEG-NHS = 1:2.5  到  1:10)将PEG 导入抗体，并使用一款分子尺寸排阻、适合蛋白分析的 TSKgel G3000SW XL 色谱柱进行 PEG 化分析的应用。

色谱条件
色谱柱         : TSKgel G3000SW XL  (7.8mmI.D. x 30cm), 2 columns
流动相:        : 20mmol/L Phosphate + 0.3mol/L NaCl (pH7.0)
流速                : 0.25mL/min
检测  : UV (280nm)
温度  : 25C
进样体积      : 20μL
样品浓度      :0.5g/L
液相色谱仪   : Agilent 1120 Compact LC (gradient auto system)
PEG 化程序  :   
PEG 化反应是在 20mmol/L  磷酸盐缓冲液  + 0.3mol/L NaCl (pH7.0)溶液中、4 度下进行的。
将 PEG-NHS 酯  (SUNBRIGHT ME-050CS,  分子量:5000, NOF 公司,  日本) / DMF 的摩尔比分别为 2.5、5、10  的混合物加入浓度为 5g/L 的抗体溶液，孵化反应 17 个小时。
取上述 100uL 的反应溶液，加入 900uL 的 20mmol/L  磷酸盐缓冲液  + 0.3mol/L NaCl (pH7.0)后进样分析测定。