摘要：

StepOnePlus™ 实时荧光定量PCR系统是Life Technologies（原ABI）推出的一款96孔实时荧光定量PCR仪。它采用基于LED的长寿命四色光学系统，可提供精确的荧光定量PCR结果， 无论是新手，还是经验丰富的用户，均可使用。近日，宾夕法尼亚州立大学的Rebecca Crouse谈了谈她的使用心得。                             

StepOnePlus™ 实时荧光定量PCR系统是Life Technologies（原ABI）推出的一款96孔实时荧光定量PCR仪。它采用基于LED的长寿命四色光学系统，可提供精确的荧光定量PCR结果，无论是新手，还是经验丰富的用户，均可使用。近日，宾夕法尼亚州立大学的Rebecca Crouse谈了谈她的使用心得。

她们实验室主要研究的是气质或性格与生理和健康的相关性。换句话说，也就是在面对挑战时，个体的行为和生理反应有何差异，以及这如何影响个体的疾病易感性和衰老速度。她们在大部分研究工作中使用动物模型，并研究大脑中的基因表达水平如何随不同行为而上调或下调。

她们之所以选择StepOnePlus，是因为Life Technologies的产品质量好，简单易用，技术人员有很大帮助，且软件程序丰富多彩，不过价格也很贵。

在实验过程中，她们采用TRI试剂来匀浆啮齿类动物的大脑组织，随后提取RNA，逆转录成cDNA。之后利用TaqMan分析组分，对几个感兴趣的基因开展qPCR分析，其中看家基因β-actin作为对照。

Crouse并没有贴出具体的实验结果，但大致介绍了一下。她们在分析中采用相对定量（△△Ct）法。首先通过样品中目的基因的平均Ct值减去看家基因的平均Ct值，获得△Ct，再将实验样品的△Ct 减去对照样品的△Ct，而获得△△Ct，最后通过2^-△△Ct 计算表达水平。

Crouse认为，如果你在一块反应板上运行整个实验，则StepOnePlus为你完成所有计算。当然，如果你使用多块反应板，你只能从软件中获得△Ct，并手动计算。

她认为，这台仪器使用简单，结果很好，如果价格能承受的话，是个不错的选择。不过，她也发现软件有时会傻傻 的。例如，运行开始后若主屏幕上出现一个带感叹号的三角形，则要立即停止运行。如果你继续运行，将无法在运行结束后收集结果。打开模板，将文件重命名，通 常能解决这个问题。这种情况很少发生，而她们也一直没找到原因。

另外，Crouse还提到了一些定量PCR实验的建议。试剂盒建议在暗处的冰上准备反应，但她认为没必要。 探针不应该长时间暴露在强光下，但制备一块反应板的时间还不足以影响产品。在第一次收到探针时就将其分装，以避免反复冻融。同时，master mix的保质期很短，通常只有6个月，而且很贵，所以一次不要订购太多。