快速高分离度LC/MS/MS定量测定麦片中的水溶性B族维生素

摘要

      采用 Agilent 6410 三重串联四极杆质谱仪 (QQQ) 分析早餐麦片中的几种水溶性 B 族维生素化合物。在快速分离高通量 SB-Aq 色谱柱上（粒径 1.8 µm）进行简单梯度洗脱，所有化合物在 7.5 分钟内洗脱出来。在 0.5-500 ppb 范围内，除吡哆醇外的化合物都展现出超过三个数量级的良好线性，并且在0.5 ppb水平上具有良好的峰面积重现性，作为最低定量限。


引言

      水溶性维生素极性很强，在反相色谱柱上保留很差。在流动相中加入离子对试剂，如七氟丁酸能够明显改善这类化合物的分离和保留。然而，使用这类离子对也有缺点，它会在质谱仪中产生较高的背景信号。因此，我们使用具有专门保留亲水性化合物键合相的色谱柱，在流动相溶剂中加入甲酸铵，开发出快速灵敏的分析方法。

      本文使用的 Agilent 1200 系列液相色谱 (LC) 系统和亚-2-微米填料色谱柱用于快速高分离度分离。该 LC系统设计降低了延迟体积，增加了压力范围和柱温。将该 LC 系统通过 G1948B 电喷雾离子源与Agilent6410 三重串联四极杆质谱仪 (QQQ) 相连接。目标化合物采用加入甲酸铵的水-甲醇梯度在 ZORBAX AQ1.8 µm 色谱柱上实现分离。

      测定水溶性维生素的普通的 LC/MS 方法是在流动相溶剂中加入七氟丁酸作为离子对试剂，其分析时间长达 30 分钟。我们开发出快速、灵敏的 LC/MS/MS 方法用于水溶性维生素的测定，该法采用高效 1.8 µm色谱柱在低扩散、600 bar LC/MS 配置下将允许筛选和定量的运行时间周期低至 10 分钟。质谱仪的线性响应超过三个数量级，除吡哆醇外的所有被测物具有0.5 pg/µL 的定量限。吡哆醇的分析具有良好的灵敏度，但良好的线性恰好被局限在三个数量级之内。对于除吡哆醇之外的所有化合物得出了浓度介于0.5 ~ 500 pg/µL 之间（吡哆醇介于 0.5 ~ 250 pg/µL 之间）的校正曲线和色谱图。

      B 族维生素的结构示于图 1。

实验部分（详见原文）


结论

      采用 LC/MS/MS 成功分析了水溶性 B 族维生素。本方法对所有化合物表现出超过三个数量级的良好线性，R 2 ＞ 0.99。在最低定量浓度下测定吡哆醇的重现性低至 2.5% RSD。成功分析了一种添加样品提取物，仅维生素 B12 的浓度低于定量限。