用反相液相色谱-质谱和体外13C 标记同时定量测定中心碳代谢和能量代谢相关的代谢物

Yang WC, Sedlak M, Regnier FE, Mosier N, Ho N, Adamec J. Anal Chem. 2008 Nov 14. [Epub ahead of print]

摘要：细胞内代谢物的全面分析是阐释细胞内生物过程的重要手段。虽然反相液相色谱-质谱法(RPLC-MS) 的分辨率和灵活性已使其成为代谢物分析最强大的工具，但即使是最简单的代谢组，其结构的多样性仍对分析提出了巨大的挑战。本文报导了一种实用的RPLC-MS 方法，用于鉴定和定量检测各类代谢物，包括糖、磷酸化糖，以及羧酸到磷酸化羧酸、核苷酸和同功酶等。本法利用(13) C 标记的标签进行体外衍生，从而实现内标定量，并能从单次色谱分析中分离出结构异构体化合物对(如葡萄糖-6-磷酸盐和果糖-6-磷酸盐)。各代谢物的校正曲线线性范围在2 个数量级以上，相关系数R (2) > 0.9975。大多数化合物信噪比为3 时检测限低于1.0 muM (20 pmol)。鉴定并定量测定了酵母裂解液中三种与糖酵解、戊糖磷酸盐通路和三羧酸循环相关的常见代谢物，相对标准偏差小于10%。