用于检测和定量分析极性细胞代谢物的一种新颖的HILIC LC-MS方法
1. 通过联用Synapt HDMS的UPLC进行HILIC LC-MS方法开发
图1给出了108种标准强极性细胞代谢物的总离子色谱图(TIC),其中包括氨基酸、DNA/RNA碱基及其磷酸盐、辅酶A、B族维生素、有机酸等。此项试验通过联用沃特世Synapt HDMS(正离子MSE模式下)的沃特世UPLC【液相色谱条件(1)】而进行。
在UPLC优化过程中进行的标准品分析表明使用酸性pH的流动相缓冲液可提高对氨基酸和有机酸的分辨率、信噪比和峰对称性。图3比较了对一种包含约2µg/mL L-赖氨酸的纯氨基酸溶液所得出的两幅MRM色谱图。靠上的色谱图通过使用碱性流动相(液相色谱条件1)所进行的分离而得出,而靠下的色谱图则采用酸性流动相(液相色谱条件2)。
图3. 比较不同pH下,包含约2µg/mL L-赖氨酸溶液的两幅MRM色谱图
最近开发的用于Synapt G2的QuanTof技术[1]以及MSE数据采集技术的应用实现了一种通用型UPLC-MS方法的开发;这种方法可在一次运行分析得到提供所有物质的定量和定性信息,既包括母离子信息也包括产物离子的信息。对于此项测定而言,系列稀释标准品以及H-S和H-G样本的数据都进行了采集(图7),所有的数据处理工作在采集完成后进行。
图7. 全扫描色谱图比较。通过UPLC-Synapt G2获取的S和G细胞萃取物的数据。
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Waters是一家总部位于美国马萨诸塞州Milford的上市公司,其高效液相色谱仪,质谱仪,热分析仪以及流变学产品和服务广泛应用于全球的实验室。 Waters是标准普尔500 (Standard & Poors 500)指...
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