His标签蛋白纯化填料推介

His标签,常年位居标签选择帮的榜首,哥家对它也是格外的重视,翻开哥家的凝胶选择指南,用于His标签蛋白纯化的填料就不下5种,那到底该如何选择呢?

HisTrap excel & Ni Sepharose excel

这是小编强烈推荐的一款新填料。它打破了常规镍填料的局限,能够耐受100mM的EDTA,没错,真的是100mM,不是10mM这么简单,可以说,对于excel,EDTA已经没有任何话语权了。再也不用担心缓冲液的不兼容而费力地更换缓冲液了。你以为仅仅这样而已么,那就太小看它了。1M的NaOH也不在话下,从此彻底清洗镍填料再也无需先脱镍,直接使用NaOH就可以彻底清洗,避免交叉污染,还不用考虑自己挂镍后载量的变化。可谓省心省力省时间。

HisTrap FF & Ni Sepharose 6 FF

这是一款最常规的填料,有着高载量、良好的兼容性、流速快、易放大等特点,是组氨酸标签手动纯化的常规选择,是一款经济实惠的入门基本款。

HisTrap FF crude

Crude填料与常用的Ni Sepharose 6 FF是一致的,它的特点在于裂解液无需离心过滤,即可直接上样,能够减少样品处理的时间。如果样品容易降解,或者柱子特别容易堵,可以考虑这款预装柱。当然,它也可以作为常规的His标签预装柱使用。

HisTrap HP & Ni Sepharose HP

HP与FF的区别在于它的粒径更细,FF的平均粒径为90μm,而HP只有34μm。因此,使用HP的填料,分辨率更高,峰展宽更窄,样品的纯度、浓度也会相对地提高,特别适合有AKTA设备的用户。

HiTrap TALON & TALON Superflow

提到His标签纯化填料,脑海里默默地浮现出蓝色,这可是惯性思维的表现。其实不只是镍离子,还有其它不同的金属离子也是可以选择的。TALON就是偶联的钴离子,因为离子半径比镍要大,其结合力相对会弱一些,使得一些结合力较弱的杂蛋白无法结合。因此,如果希望通过一步法获得更好的纯度,可以选择这款可爱的粉红色填料。

Hitrap IMAC HP / FF & IMAC Sepharose 6 FF

其实这就是未耦合金属离子的填料,只是它的耦合方式经过优化,与早期的Chelating填料相比,有着更强的结合能力,和更稳定的化学性质。在科学家的不断改进下,摸索出的新工艺,在高载量的同时,金属离子也不易脱落,大大提高了金属亲和填料的性能。

Hitrap Chelating HP & Chelating Sepharose FF

这是最早期的一款填料,采用IDA的偶联方式,有着高载量的特点,价格非常实惠。有时候,不同的结合力,会带来不同的选择性。

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