GST（谷胱甘肽转移酶）能特异的与谷胱甘肽结合，表现为酶和底物的作用原理，从而利用这个原理，将GST做成标签表达出融合蛋白，与带谷胱甘肽配基的亲和介质特异性结合，从而纯化出目标蛋白，再用特异性的酶将GST标签切除从而得到天然蛋白。GST融合蛋白纯化的特点有：纯度高、纯化条件温和、保持蛋白活性、促进蛋白可溶性表达等。而在使用过程中有时也会遇到一些纯化的问题，今天，小编就GST标签蛋白纯化中常会遇到的问题：GST标签蛋白不能被高效的洗脱，跟大家进行一下梳理和解答。

GST标签蛋白不能被高效的洗脱

可能的原因1：
洗脱缓冲液的体积或者洗脱时间不够。
建议：
增加洗脱缓冲液的体积。有些情况下，尤其是柱上酶切标签蛋白时，需要更大体积的缓冲液来洗脱标签蛋白。或通过降低洗脱过程中的流速来增加洗脱时间。对于离心方法，可以尝试降低洗脱过程中的离心速度。

可能的原因2：
谷胱甘肽的浓度不够。
建议：
增加洗脱缓冲液中谷胱甘肽的浓度：一般使用中建议的10mM浓度对于大多数应用来说足够了，但是也存在例外。可以尝试使用50mM Tris-HCl，20-40mM 还原型谷胱甘肽，pH8.0作为洗脱缓冲液。

可能的原因3：
洗脱缓冲液的pH过低。
建议：
增加洗脱缓冲液的pH值：将pH增加到8-9会增强洗脱而不用提高洗脱所用谷胱甘肽的浓度。

可能的原因4：
洗脱缓冲液的离子强度过低。
建议：
增加洗脱缓冲液中的离子强度，在洗脱缓冲液中加入0.1-0.2M的氯化钠也可能会使结果变好。

可能的原因5：
非特异的疏水相互作用导致蛋白和柱材非特异的结合或聚集，从而阻止了标签蛋白的溶解和洗脱。
建议：
向洗脱缓冲液中加入非离子去垢剂。加入1%的TritonX-100或2%的n-octylglucoside可以显著提高某些GST标签蛋白的洗脱。

可能的原因6：
洗脱缓冲也中的谷胱甘肽被氧化了。
建议：
使用新鲜的洗脱缓冲液。加入DTT。

最后，关于GST标签蛋白的纯化，我们还有第三大类问题要与大家分享，敬请期待GST标签蛋白纯化小贴士（三），希望我们的总结和建议能够为您的实验带来更多帮助。