层析实验做多了，想不想来点新玩法，让层析也更easy起来呢?今天就让小编给大家介绍AKTA pure和?KTA avant的新玩法——两步层析吧。

所谓自动化两步层析，是指初始样品上样后，经过全自动运行，直接得到经过两种层析柱纯化的样品。通常第一步为亲和层析或经过优化的离子交换层析，第二步为脱盐或凝胶过滤层析。

自动化两步层析优势：

• 省时省力：无需手动操作即可完成两根层析柱的连续层析过程。
• 安全：减少样品转移时间。
• 避免人为失误：连续自动化运行可减少人为失误。

两步层析尤其适合样品种类较多、需要不止一步纯化且纯化流程类似的层析试验。

在AKTA pure或AKTA avant可通过两种方法实现自动化两步层析：两步直接串联或通过样品环暂存样品。

（1）两步直接串联：

第一根层析柱洗脱的目的峰直接上样至第二根层析柱，典型应用：抗体纯化后直接进行pH中和。

运行过程流路：

1． 系统准备：system wash
2． Column 2平衡：system pump-V9-V-Coulumn 2-UV-Out
3． Column 1平衡、上样和清洗：system pump-column 1-UV-Out
4． Column 1洗脱及Column 2上样：system pump-column 1-UV-V9-V-Column 2-V9-V-Out
5． Column 2洗脱：system pump-V9-V-Coulumn 2-UV-Out

（2）通过样品环暂存样品：

即在第一根层析柱和第二根层析住之间配置样品环，将第一步洗脱的样品先暂存在样品环中，之后通过流路切换将样品环中的样品上样至第二根层析住。典型应用：his标签蛋白纯化并去除咪唑。

运行过程流路

1． 系统准备：system wash
2． Column 1 平衡： system pump-column 1-UV-Waste
3． Column 1 上样： system pump- V9-M-column 1-UV-Waste
4． Column 1 洗脱（出峰之前）：system pump-column 1-UV-Waste
5． Column 1 洗脱（出峰过程）：system pump-column 1-UV-Out -V9-M-V9-inj-V9-L-Column 2-Waste
6． Column 1 洗脱（出峰结束）：system pump-column 1-UV-Waste
7． Column 2 平衡：system pump-column 2-UV-Waste
8． Column 2 上样：system pump-V9-L-column 2-UV-Waste
9． Column 2 洗脱：system pump- column 2-UV-Waste

（3）检查实验配置

使用AKTA pure或AKTA avant，轻松实现全自动两步层析。当然，开始之前我们需要检查一下我们的层析实验和设备配置是否合适：

• 检查两步层析中层析柱是否匹配：层析柱大小、适合的样品体积、压力等是否匹配。
• 检查设备入口管道配置：两步层析所需要buffer种类较多，往往需要更多入口。
• 使用样品环阀时样品环体积：暂存样品所使用的样品环体积是否合适。
• 常用的AKTA pure或AKTA avant都需要经过额外的阀门配置实现两步层析，具体配置请和您身边的技术支持联系。