浅谈液相色谱中的低压梯度和高压梯度

液相色谱分析中，我们常会提到低压梯度和高压梯度，如最常见的四元低压梯度和二元高压梯度。那么四元低压梯度和二元高压梯度两者有什么区别呢？ 

上面提到的四元低压梯度和二元高压梯度中的“元”指的是可以同时控制流路的个数，如下图：

四元低压梯度系统

图上我们可以看出四元低压系统是由单泵加四元低压比例阀加在线脱气机加混合器构成，它最多可同时有四个流动相进入流路，按照预先设定的比例进行混合，依靠电磁阀的开闭，使泵分段输送不同流动相。由于在常压下混合，气泡很容易从溶剂中析出，较易产生气泡，配备在线脱气机可消除气泡影响，四元低压梯度洗脱时，各流动相比例在仪器上进行设定之后，运行时按照用户的设定通过控制电磁阀自动开闭自行改变流动相配比，将样品中组分分离开来。

二元高压梯度系统

二元高压梯度配置是由双泵加在线混合器构成，工作方式为双泵并联，可同时有两个流动相，按照预先设定的配比进入，在高压下进行混合，混合配比更准确，提高了工作效率。二元高压梯度洗脱时，在分析过程中由两个泵通过改变自身流速来自动改变流动相配比，将样品中无法分离的物质进行洗脱，在谱图中得到分开峰的效果，有助于提高分析准确性，避免遗漏重要物质的检测。

四元低压和二元高压对比

上图可以看出四元低压梯度系统采用单泵加梯度比例阀来实现，因为比例阀是在泵前的，并且各流路的溶剂在比例阀里就混合在一起，所以是泵前、低压混合。二元高压梯度的流量由每个泵单独控制，精度更高，混合室在泵后，高压下混合效率也高很多，梯度组成更精确。

另外，四元低压梯度的混合比例是通过控制不同流路的电磁开闭时间长短来控制的，理论上混合的比例也是准确的，但是实际上无论它动作多么快，总还是需要一点时间的。比如 A 路和 B 路各50％混合，在单位时间内，A 路和 B 路的电磁各开通50％的时间，电磁的延迟影响可以通过调整补偿系数来尽量弥补。但是如果极端一点的情况，A 路99%, B 路1%，这种情况下单位时间内，A 路的电磁开通99%的时间，B 路只占1%，时间是很短的，这时 B 路电磁的延迟就影响很大了，这种情况建议使用高压梯度。

此外，低压梯度还应注意清洗，尤其使用缓冲盐时，电磁阀送液管路可能被堵住。一般地，对于常规分析来说，四元低压梯度可以满足需要；如果分析样品成份复杂、对重现性要求较高，或者需要在低流量下进行梯度分析，还是选择高压梯度好一些。

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