流式细胞术在心血管病相关生物标志物中的应用

心血管病是一组涉及心脏和血管的疾病，包括心脏病、高血压、心力衰竭等。各类生物标志物在心血管疾病的早期诊断、风险管理和疾病治疗中发挥着重要作用，通过不同的仪器和方法学检测体内细胞、蛋白质或其他生物分子的水平来评估疾病状态。

2022年由中华医学会健康管理学分会、中华医学会检验医学分会以及中国医师协会心血管内科医师分会共同组织多学科专家代表制定了《生物标志物用于体检人群心血管病风险评估的专家共识》。

图1.2. 用于体检人群心血管病风险评估的生物标志物

注：+++为推荐用于心血管病风险分层，作为心血管病一级预防指标，具有大量临床数据支持并且在心血管病相关指南或共识中得到认可或推荐；++为建议考虑用于心血管病风险分层，具有临床数据支持，但意见或临床证据不一致/有分歧，或数据样本量局限；+为目前不作常规推荐，具有与心血管病风险的相关性，但循证医学证据有限；ESC为欧洲心脏病学会；ACC为美国心脏病学会；AHA为美国心脏协会；HFSA为美国心力衰竭协会

图3. 用于体检人群心血管病风险评估的潜在生物标志物

流式细胞术可以分析各类细胞成分、细胞表面和胞浆标志物、蛋白质、核酸、外泌体、囊泡等的数量、功能和状态，接下来我们将分享流式细胞术应用于心血管疾病的相关生物标志物检测。

01

细胞因子和其它可溶性蛋白成分分析

流式细胞术可以定量检测细胞因子、炎症因子等的水平，从而可以基于炎症水平来研究心血管疾病的炎症发生和进展机制以及评估治疗干预的效果。前文专家共识中提到的炎症因子IL-6、血小板活化标志物sCD40L等就可以通过流式荧光法进行定量检测，从而为体检人群心血管病风险评估提供参考依据。

02

细胞、血小板及其表面标志物分析

流式细胞术检测和分析细胞表面的特定蛋白质，例如免疫细胞的受体、活化标志物等，从而可以基于免疫细胞、血小板等水平研究心血管疾病。研究数据发现，循环内皮细胞（CEC）在健康人外周血中数量极少，而在疾病或血管损伤条件下动脉粥样硬化、急性心梗、糖尿病、红斑狼疮等疾病中明显增加，因此可以用来判断血管内皮细胞损伤情况。Mancuso等人通过流式细胞术检测CEC和内皮祖细胞（CEP），并对该方法进行验证和标准化，证明了流式细胞术检测CEC和CEP的可行性和可靠性。

图4和图5. 流式细胞术检测和设门分析CEC和CEP：CEC的表型特征为：Syto16+CD31+CD146+；CEP 表型特征为：Syto16+CD31+CD133+。Syto16和7AAD用来区分细胞的死活和凋亡，其中坏死细胞：Syto16low7-AAD+；凋亡细胞：Syto16low7-AAD-；活细胞：Syto16bri7-AAD-。

03

细胞外囊泡（EV）

细胞外囊泡是细胞分泌的脂质小泡，包含脂质、蛋白质、RNA和DNA等多种生物活性物质，这些物质在心血管疾病的生理和病理过程中起着关键作用，可以调控基因表达、影响细胞表型和介导生物行为等，广泛用于心血管疾病的早期诊断、治疗方案等研究。随着检测技术的进步，流式细胞仪可以测量小至100nm的单个颗粒，通过仪器设置和参数调整，再加上荧光标记抗体的配合使用和高通量的检测，使得流式细胞术是EV测定的重要方法。

图6. 细胞外囊泡与心血管疾病

图7. 细胞外囊泡与心血管疾病相关的临床试验研究

总的来讲，流式细胞术可以检测多种心血管疾病相关的标志物，有助于提高临床诊断的准确性和敏感性，为体检人群、高风险人群以及心血管治疗患者综合评估疾病风险；也为心血管疾病的治疗和药效评估提供靶点和指标。

最后，欣欣向荣的春天到来了，给大家比一颗小心心，祝愿大家心通、气和、体顺！

参考文献

Patrizia Mancuso, Pierluigi Antoniotti, et al,. Validation of a Standardized Method for Enumerating Circulating Endothelial Cells and Progenitors: Flow Cytometry and Molecular and Ultrastructural Analyses. Clin Cancer Res 1 January 2009; 15 (1): 267–273.

Dickhout A, Koenen RR. Extracellular Vesicles as Biomarkers in Cardiovascular Disease; Chances and Risks. Front Cardiovasc Med. 2018 Aug 22;5:113.

中华医学会健康管理学分会, 中华医学会检验医学分会, 中国医师协会心血管内科医师分会. 生物标志物用于体检⼈群心血管病⻛险评估的专家共识 [J] . 中华健康管理学杂志, 2022, 16(8) : 505-519.