全球首款丨恒瑞源正针对中国人群高频 HLA 的实体瘤 TCR-T 产品公布临床前研究成果

本月，恒瑞源正在 Nature Commnunications 上发表题为 HLA-class II restricted TCR targeting human papillomavirus type 18 E7 induces solid tumor remission in mice 的文章，首次披露了公司首个进入临床的 TCR-T 产品（HRYZ-T101）的临床前研发过程。HRYZ-T101 注射液是恒瑞源正第一款 TCR-T 细胞治疗产品，并在 2023 年 5 月 11 日获得临床试验默示许可，用于治疗人乳头瘤病毒 18 亚型阳性（HPV18+）的实体瘤。

本研究关键应用技术：

MASCT（Multi-Antigen Stimulated Cell Therapy Injection），多抗原自体免疫细胞注射液，是针对实体瘤的自体免疫细胞治疗技术系列产品，包含负载 15 种肿瘤相关抗原的成熟自体 DC 细胞和上述 DC 细胞体外活化扩增的自体效应 T 淋巴细胞，通过二者序贯治疗清除肿瘤。

ReGET（Reverse Genetic Engineering of TCR），TCR 逆向基因工程，收集 MASCT 治疗获益的肿瘤患者的 PBMCs，并用 HPV18E7 抗原肽脉冲自体树突状细胞进行体外刺激。经过几轮刺激后，筛选出针对 HPV18E7 抗原肽的特异性 T 细胞，进行批量和单细胞 TCR 测序（scTCRseq），最终筛选出识别 HPV18E7 抗原肽的 TCR。

RTCA（xCELLigence Real Time Cell Analysis），RTCA 实时细胞分析技术，是利用安捷伦 xCELLigence RTCA 实时细胞分析仪，通过阻抗技术无标记检测 TCR T 细胞对靶细胞的实时连续杀伤。不仅可以通过不同 ET 比得到剂量依赖性杀伤曲线，还可以通过多次的抗原 Challenge 实现多轮次的重复杀伤。另外由于无标记无损伤的检测，杀伤检测后的 TCR T 细胞还用于流式检测 T 细胞的免疫分型，实现一孔多用，获得尽可能多的同步数据。

利用 ReGET 技术成功筛选到靶向 HPV18E7 肿瘤抗原的 TCR 分子（10F04）

该患者在 2011 年确诊 HPV+ 宫颈鳞状细胞癌，接受了根治性切除术、辅助化疗和放疗等常规治疗。然而，在 2013 年出现复发骨转移。由于标准治疗无效，患者自 2014 年起反复接受了 MASCT 治疗，骨转移灶明显消退，目前已无瘤生存超过 9 年（图 1 a、b）。研究者在该患者 MASCT 治疗期间和之后，都观察到了强大而持续的免疫反应（图 1 c、d）。因此有可能是患者体内识别 HPV18E7 抗原 T 细胞的存在，才帮助这名晚期宫颈癌患者实现长期生存。随后研究人员利用 ReGET 技术筛选出 10F04 TCR 特异性识别中国人群高频的 HLA-II 分子 HLA-DRB1*09:01 递逞的 HPV18E7 抗原肽。

图 1. 一名长期存活的转移性宫颈癌患者在接受 MASCT 治疗后产生的针对 HPV 抗原的持久 T 细胞免疫反应

10F04mc TCR-T 在体外和体内显示出卓越的抗肿瘤效力

研究人员发现 10F04 TCR T 细胞由于转导配对效率低，因此通过鼠源化和密码子优化避免与内源性 TCR 配对错误，从而改善 TCR 的功能。优化后的 10F04mc TCR-T 细胞的表达更高，在体外和小鼠模型中均展现了强大的抗肿瘤活性。其中 RTCA 检测不同 ET 比的实时杀伤曲线呈现剂量依赖性，表明 10F04mc TCR-T 细胞对靶细胞的杀伤是特异性的。另外体内小鼠模型中也能诱导肿瘤消退或完全根除肿瘤（图 2）。

图 2. 10F04mc TCR-T 在体外和体内的抗肿瘤效力检测

10F04mc TCR 诱导多功能和持久抗肿瘤活性的 CD4 T 细胞

除 CD8+ T 淋巴细胞外，CD4+ T 淋巴细胞在肿瘤控制中也发挥着重要作用。研究者将 CD4+ 和 CD8+ 10F04mc TCR T 分别进行体内体外抗肿瘤研究，CD4+ 10F04mc TCR T 不仅在体内更好的清除肿瘤（图 3e），在体外 RTCA 上检测的多轮次重复杀伤（36 h/次，共 4 次）数据也表明单独的 CD4+ TCR T 细胞的持久性杀伤更好（图 3c）。重复杀伤的同时进行流式检测，从分析结果来看两类群细胞有着不同的 CD27 和 CD39 的分化趋势，表明两种细胞有着不同的功能差异（图 3d）。基于这些发现，研究者认为 10F04mc TCR 能够重定向 CD4 和 CD8 T 细胞，并且持续的长期抗肿瘤活性主要是由 CD4+ TCR-T 细胞介导，表现出持续的细胞因子分泌、肿瘤杀伤能力和记忆表型。

图 3. 10F04mc TCR 诱导多功能和持久抗肿瘤活性的 CD4 T 细胞

10F04mc TCR 临床展望：

大多数处于临床阶段的 TCR 疗法仅限于 HLA-A* 02:01，这种疗法在白种人中的流行程度高于亚洲人。相比之下，HLA-DRB1*09:01 在亚洲人（20.43%），尤其是中国人（28.67%）中很普遍，这为 10F04mc TCR 疗法在这一人群中的应用提供了机会。除了靶向原发性 HPV18E7 外，10F04m TCR-T 还能识别 HPV45E7，这表明 10F04mc TCR-T 疗法的潜在受益人群可能会进一步扩大。

10F04mc TCR 具有良好的治疗潜力和安全性，2023 年 5 月 11 日获得 CDE 临床试验默示许可，目前正在进行治疗 HPV18 阳性癌症的 I 期临床研究（NCT05952947）。据我们所知，这是第一项获得批准的 HLA-II 限制的 TCR-T 新药临床试验（摘自文章）。

安捷伦细胞治疗整体解决方案

安捷伦实时细胞分析仪 xCELLigence RTCA 是基于阻抗的无标记细胞检测，被广泛用于 CAR-T 等细胞疗法的杀伤检测和产品放行，另外还可以通过简单的重复杀伤检测，模拟体内的抗原重复刺激。同时结合流式细胞术检测杀伤后的 T 细胞耗竭标志物的表达，可以帮助我们了解细胞治疗产品的持久性以及预测体内药效。安捷伦 NovoCyte 系列流式细胞仪，提供多达 30 个荧光通道的灵活配置，精确分析细胞表面 marker 的表达以及多因子的释放。安捷伦 Seahorse 细胞能量代谢分析仪，实时检测活细胞的耗氧率 (OCR)、质子释放率 (PER) 或细胞外酸化率 (ECAR) 以及 ATP 产生速率。在细胞治疗领域，越来越多的科学家关注代谢层面的工程改造，从而更好的适应实体瘤微环境，增加药效，突破实体瘤现阶段研发瓶颈。

xCELLigence RTCA 实时细胞分析

NovoCyte 流式细胞仪

Seahorse 细胞能量代谢分析仪

关于安捷伦细胞分析安捷伦细胞分析平台包括xCELLigence RTCA实时细胞分析仪、Novocyte系列流式细胞仪、Seahorse能量代谢分析仪以及Synergy系列微孔板检测仪和Cytation 系列（共聚焦）细胞成像多功能微孔板检测仪。安捷伦细胞分析平台聚焦基础科研与细胞与基因治疗产品的开发全流程，作为适配新一代疗法的强大分析工具，提供多方位的细胞效力检测和深度的细胞分析，并致力于研发、生产质控以及临床的全方位检测与分析方案开发。