淋巴瘤诊疗，流式伴“理”行——多色流式细胞术在淋巴瘤诊疗中的应用

淋巴瘤的定义和分类

淋巴瘤（Lymphoma）是一类起源于淋巴结或其他淋巴组织的造血系统恶性肿瘤，依据世界卫生组织（WHO）提出的血液肿瘤的分类标准主要可分为霍奇金淋巴瘤（HL）和非霍奇金淋巴瘤（NHL）两大类。今天我们一起分享流式细胞术在淋巴瘤病理诊断、治疗监测中的应用。

Part 1.

一张图总结 FCM 在淋巴瘤诊疗中的应用

FCM 在淋巴瘤中的临床应用

图 1. 流式细胞术检测内容及在淋巴瘤诊疗中的应用

Part 2.

罗嗦几句 FCM 在淋巴瘤诊疗中的应用

淋巴瘤免疫分型

免疫分型的意义：判断细胞的发育成熟度和进行分类，判断是否为异常细胞以及是否存在单克隆限制性表达，从而为淋巴瘤的综合诊断、进一步检查、预后评估、治疗靶点提供参考。

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一线抗体

二线抗体

治疗靶点、侵袭性相关二线备选抗体

B-NHL

CD5、CD10、CD19、CD20、CD45、κ和λ等

CD11c、CD22、CD23、CD25、CD38、CD43、CD79b、CD103、FMC-7、Bcl-2、cκ和cλ等

CD49d、CD52、CD81、CD123、CD160、CD200等

T/NK-NHL

CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD45和CD56等

cCD3、CD10、CD16、CD25、CD26、CD30、CD57、TCRαβ、TCRγδ、颗粒酶Ｂ、穿孔素等

CD279、CD94、CD161和CD158系列等

表 1. 流式细胞术用于淋巴瘤诊断及分型常用抗体

淋巴瘤 MRD 监测

MRD（Minimal Residual Disease）是指患者经过治疗达到完全缓解后，体内残存的通过形态学等传统方法无法检测到的任何水平的微量肿瘤细胞状态。随着技术的发展和检测水平的提高，MRD 的检测逐步应用于临床检验和药物临床试验，为淋巴瘤的疗效评估、疾病复发早期识别、预后分层、个性化治疗提供重要参考依据。

疾病

MRD 常用抗体（建议根据患者初诊免疫表型和治疗史制定检测方案）

CLL

CD5、CD19、CD20、CD23、CD43、CD45、CD79b、CD81、CD160、CD200、ROR1等

MCL

CD5、CD11a、CD19、CD20、CD22、CD23、CD45、CD62L、CD79b、CD200等

HCL

CD11c、CD19、CD20、CD22、CD25、CD45、CD103、CD123、CD200、LAIR1等

MM

Kappa、Lambda、CD19、CD20、CD27、CD28、CD38、VS38、CD45、CD54、CD56、CD81、CD117、CD138、CD200等

表 2. 流式细胞术监测 NHL MRD 常见抗体

Car-T 治疗

嵌合抗原受体 T 细胞（Chimeric Antigen Receptor T cells，CAR-T 细胞）疗法是指通过基因修饰技术将带有特异性抗原识别结构域及 T 细胞激活信号的遗传物质转入 T 细胞，使 T 细胞直接与肿瘤细胞表面的特异性抗原结合而被激活、增殖，从而发挥靶向杀伤肿瘤细胞的作用。

表 3. 流式细胞术在 CAR-T 治疗中的应用项目和意义

项目

常用抗体

免疫分型或MRD

参考表1、表2

免疫微环境

免疫检查点如CD152、CD223、CD279和CD366等；MDSC细胞（CD14、CD33、HLA-DR、CD11b、CD15、CD16）；Treg细胞（CD4、CD25、CD127）等标记

CAR-T细胞

CAR检测抗体、CD3、CD4、CD8、CD14、CD19、CD56、CD45等

免疫细胞亚群

淋巴细胞、粒细胞、单核细胞及其亚群（CD3、CD4、CD8、CD14、CD16、CD25、CD28、CD38、CD45、CD45RA、CD45RO、CD62L、CCR7、CD56、CD127、HLA-DR等）

细胞因子

IFN-γ、TNF‑α、IL-1RA、IL-1β、IL-2、IL‑4、IL‑5、IL‑6、IL‑8、IL‑10、IL‑12、IL‑13、IL‑15、IL‑17、IL‑18、IL‑21、IL‑23、IL‑31、IL‑36、单核细胞趋化蛋白‑1、穿孔素和颗粒酶B、促红细胞生成素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、sCD25、铁蛋白等。

表 4. CAR-T 治疗中流式细胞检测项目及常用抗体

CD34+ 造血干细胞移植

自体造血干细胞移植（auto-HSCT）是淋巴瘤的常用治疗手段。流式细胞术定量检测 CD34+ 干细胞具有快速、简便、可靠等特点，已广泛应用于移植物中 HSC/HPC 数量的检测，并在判断供体细胞的植入水平、确定采集造血干细胞的时机、随访免疫重建状态等中发挥重要作用。

项目

常用抗体

CD34+干细胞

CD34、CD45、7-AAD等

表 5. CD34+ 干细胞流式细胞检测常用抗体

免疫评估和监测

淋巴瘤等疾病的发生、进展、预后与人体免疫功能和状态的异常密切相关。通过淋巴细胞亚群、细胞因子、免疫细胞精细分型等动态检测，可以为疾病的早期筛查、疗效评估、个性化治疗、免疫重建评估与移植物抗宿主病预防、疾病复发早期预警、副作用监测和预后评估提供免疫学指标。

项目

常用抗体

免疫细胞精细亚群

TBNK淋巴细胞亚群（发育、功能、活化、衰老、耗竭等）

CD3、CD4、CD5、CD8、CD16、CD19、CD24、CD25、CD27、CD28、CD38、CD45、CD45RA、CD45RO、CD56、CD57、CD62L、CD69、CD127、CD183、CD196、CD279、HLA-DR等

单核细胞亚群

CD14、CD16、HLA-DR等

DC细胞

Lineage Cocktail 1、CD123、CD11c、HLA-DR等

细胞因子

细胞因子

IFN-γ、TNF‑α、IL-1RA、IL-1β、IL-2、IL‑4、IL‑5、IL‑6、IL‑8、IL‑10、IL‑12、IL‑13、IL‑15、IL‑17、IL‑18、IL‑21、IL‑23、IL‑31等。

表 6. 免疫评估流式细胞检测项目常用抗体

细胞周期和 DNA 倍体检测

细胞周期和 DNA 倍体检测具有以下临床意义：作为癌前病变发展的一项指标；用于肿瘤、淋巴瘤的早期诊断和鉴别；了解化疗药物对细胞循环周期的作用；判断疗效和指导治疗方案。

项目

常用抗体

细胞周期和DNA倍体

荧光染料PI等

表 7. 细胞周期和 DNA 倍体流式细胞检测常用抗体

Part 3.

看都看到这里来了，或许您想要了解更多

流式细胞仪及其配套解决方案

可检测标本

骨髓、外周血、淋巴结、细针穿刺、脑脊液、胸腹水等标本

仪器和试剂

1)

具备国际认可的标准化方案或专家共识中推荐的荧光染料标记和克隆号的流式检测抗体；

2)

具备智能、多色、高性能的流式细胞仪，可满足稀有样本、多参数同时检测的需求；

3)

部分机型支持样本回收功能，剩余的未被检测样本可自动回收至样本管内进行保存或进一步检测，对稀有样本友好；

4)

高精度注射泵上样，样本体积精确控制，无需任何耗材直接绝对计数；

5)

可选配自动上样器，实现孔板和试管架上批量样本的自动快速采集；

6)

提供自动化的仪器 QC 测试功能，并跟踪一段时间的测试结果，确保提供可靠一致的结果；

7)

提供自动、手动两种荧光补偿方法，可以方便快速地实现多个荧光通道之间的正确补偿；

8)

配套 DNA、淋巴细胞亚群、细胞因子等分析软件；此外采集样本并分析数据后可导出为模板文件，简化后续分析步骤、减少重复工作、提高工作效率。

此文仅供科普，对患者的临床诊治应结合其症状/体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。

参考资料

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2. 中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会,中华医学会血液学分会,中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会T细胞淋巴瘤工作组,张曦,徐卫,高力,邹德慧,饶军.成人T淋巴母细胞淋巴瘤诊断与治疗中国专家共识(2023年版)[J].中华血液学杂志,2023,44(5):353-358.

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11. Riva G, Nasillo V, Ottomano AM , et al. Multiparametric flow cytometry for MRD monitoring in hematologic malignancies: clinical applications and new challenges[J].Cancers (Basel),2021,13(18):4582.

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