【求助】为什么细胞总也铺不匀？

最新回复

• join (2014-10-11 11:19:08)

  我也碰到了这种情况，听别人介绍接种细胞前每个孔里先加少量培养液，接种后抖动培养板，效果好了一些，但问题还是没完全解决，还是有的地方没有细胞，不知道哪位大侠能介绍一下更好的方法啊？

• zzzz (2014-10-11 11:19:40)

  
  可能是否和细胞种类也有关系吧，我以前养MKN28，45也有这样，但现在cos－7很好，只要前后轻轻摇晃几下，在培养箱中再摇。

• uuooii (2014-10-11 11:20:03)

  
  我做MTT的时候用的96孔版也有这样的问题，24孔回好一些，不过我觉得对实验结果的影响不是很大。如果做转染，现在有用DULE LUCIFERASE系统做校正，所以结果还可以。如果做MTT可能多做几组会好一些，其他的俺就没作过。因为不管做什么实验，之前是不是都要有一个优化细胞数量的问题，你有没有作过？
  

• ha111 (2014-10-11 11:20:32)

  经验之谈
  
  细胞均匀度特别是对于转染来说是很重要的（很多人都为此苦恼），本人的做法你可以借鉴一下： 首先常规接种后，切忌摇晃！！这一点很重要，举个例子来说，装一杯污水，轻轻一晃，什么乱七八糟的东西都聚到中间了，可能是向心力在做怪吧。本来种的较均匀的细胞越发聚到中间了，这是个误区！ 如不是很均匀，对于6孔板，因为培养基较多，用吸管轻轻吸吹几次，中间吸出，边缘打进，反复几次后盖盖后不要晃动，小心置培养箱，待贴壁后再观察，切忌反复拿动。对于12或24孔板就简单一些，培养基较少，吸出打进反复几次就可以了。 这方面如有问题多联系！
  

• birdfish (2014-10-11 11:20:46)

  
  果然不错。 不过我有疑问，为什么在24-well format中，细胞往往多集中于孔的边缘，而不是中间？

• junhun (2014-10-11 11:21:12)

  我是这样做的：先在培养孔里加少许培养液，然后接种细胞，震荡，就象楼上所说，是左右的抖动，我是用手轻敲板子的边缘，然后很重要的一步是在平整的操作台上室温放置10-15分钟，然后到培养箱中培养，到贴壁时再看，绝对没有不均匀的现象。另外，取放板子的过程都要轻轻的，避免晃动。可以试试。

• any333 (2014-10-11 11:21:30)

  
  你说的情况是少数，只需用吸管吸出再打进连续3－5次即可。

• gogo (2014-10-11 11:22:05)

  细胞均匀度特别是对于转染来说是很重要的（很多人都为此苦恼），本人的做法你可以借鉴一下： 首先常规接种后，切忌摇晃！！这一点很重要，举个例子来说，装一杯污水，轻轻一晃，什么乱七八糟的东西都聚到中间了，可能是向心力在做怪吧。本来种的较均匀的细胞越发聚到中间了，这是个误区！ 如不是很均匀，对于6孔板，因为培养基较多，用吸管轻轻吸吹几次，中间吸出，边缘打进，反复几次后盖盖后不要晃动，小心置培养箱，待贴壁后再观察，切忌反复拿动。对于12或24孔板就简单一些，培养基较少，吸出打进反复几次就可以了。 这方面如有问题多联系！
  
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  不错，多谢，我按你的方法做果然细胞很均匀！希望大家能多参加我们的论坛，介绍你们宝贵的经验，而这些经验在书本上是看不到的，但对于我们的试验又是很关键的！

• october7 (2014-10-11 11:22:37)

  果然不错。 不过我有疑问，为什么在24-well format中，细胞往往多集中于孔的边缘，而不是中间？
  
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  你说的这种情况也很常见,前面我说过,在24孔板内的培养基较少,所以只需用吸管连续吸吹几次就可以了,吸的时候要连细胞一起吸完再打下去(动作不要过猛否则培养基会溅出). sorry,由于前几天本机子没装五笔所以打字很是困难,其实前面已发一贴是对你说的,只是忘了引用你的,不好意思!

• chuntian1983 (2014-10-11 11:22:58)

  
  采用前后摇晃的方法和用吸管吹打都是很有用的经验。值得推广。

• rxcc33 (2014-10-11 11:23:19)

  我用的摇动方法是8字摇动培养板，这样效果不错的，很均匀！

• tianmei001 (2014-10-11 11:23:34)

  楼上建议不错,但有时细胞还会集中于孔的边缘,可能是由于吸管来回吹吸的原因吧.

• =pkchen= (2014-10-11 11:23:55)

  
  我觉得和液体表面张力有关，孔越小越明显。另外，对培养器皿底部地处理也很重要.我觉得必要的摇晃还是应该的，关键看你摇晃地是不是对，只要不作产生涡流底旋转型动作就好。

• baidukk (2014-10-11 11:24:10)

  
  吸管来回吹吸，只是在孔中间进行操作，应该不会使细胞集中到孔的边缘吧。

• ha111 (2014-10-11 11:24:32)

  
  我也曾为种六孔板不匀而大伤脑筋，重复做了好几次也没有很大的进展，很是郁闷，后来想了一些方法改进，现在做的要比以前好些了，有一些心得供大家参考： （1）像hblfj说的，种完后不要再显微镜下观察，这样可以增加晃动的机会，事实证明晃动可以使细胞集聚。 （2）种的细胞时候细胞不要太多，最好在种之前计数，培养液最好多加一点，不要觉得使浪费。 （3）细胞在孔中央吹打 支持GUMP的观点，hblfj是细胞培养的专家，我们有什么搞不定的都问他的
  

• zwsyrt (2014-10-11 11:25:02)

  细胞均匀度特别是对于转染来说是很重要的（很多人都为此苦恼），本人的做法你可以借鉴一下： 首先常规接种后，切忌摇晃！！这一点很重要，举个例子来说，装一杯污水，轻轻一晃，什么乱七八糟的东西都聚到中间了，可能是向心力在做怪吧。本来种的较均匀的细胞越发聚到中间了，这是个误区！ 如不是很均匀，对于6孔板，因为培养基较多，用吸管轻轻吸吹几次，中间吸出，边缘打进，反复几次后盖盖后不要晃动，小心置培养箱，待贴壁后再观察，切忌反复拿动。对于12或24孔板就简单一些，培养基较少，吸出打进反复几次就可以了。 这方面如有问题多联系！
  
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  谢谢,难怪我每次细胞总之长不均匀,尤其是细胞瓶的边缘和后方
  

• jujuba (2014-10-11 11:25:26)

  
  我是做MTT的，买了进口96板后smmc7721铺板时，细胞总是集中在中央。也就在前几天，突然突发奇想，我也没想上面说的那么正规，就随便的O型震荡，再上下震荡，最后再O型震动了一下，我看细胞分布都非常的均匀。
  另外，希望跟我做的前辈能给我点建议

• nut6694 (2014-10-11 11:25:42)

  
  不错，我的细胞在24孔培养板中也是边缘先张满，中间比较稀松，难道有边缘效应？

• qhyu (2014-10-11 11:25:59)

  
  我作MTT时没有出现分布不均。相反，24板却集中在中央，后来我先加500ul陪基，待细胞贴壁后在多加些，细胞分布就均匀了。我想，与板子的质量有关，可能是板子底部不平引起的。
  

• linlinstar (2014-10-11 11:26:17)

  
  上次我试验时,无意中将1ML的细胞悬液分成两次吸,每次0.5,发现铺得比什么时候都要均匀些,不知道大家的结果是不是一样的.还想试试看,
  现在做转染老是失败,请教大家什么地方可以找到这方面的资料