【求助】PQE30表达蛋白质

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• zwsyrt (2014-7-03 18:02:48)

  pQE30表达用的菌株是M15或SG13009，不是JM109。具体信息你可以用网上下载一份《The QIAexpressist》看看，里面就是pQE系列载体的使用说明，还包括用Ni-NTA柱纯化的资料，很全的。

• mamamiya (2014-7-03 18:03:15)

  
  JM109是用来保存pQE质粒的，不能用于表达，我们实验室采用M15表达蛋白，具体条件为：
  1，过夜摇菌，活化。
  2，1：500接种于新的培养基中，摇菌4小时；
  3，加入两倍体积的新的培养液，加入IPTG，总浓度1mM；
  4，摇菌2-3小时。
  你可以试试。

• IAM007 (2014-7-03 18:03:41)

  
  
  那为什么还有很多的文章上都是用JM109表达的呢？难道是假的？

• JK.jon (2014-7-03 18:04:21)

  
  我也是看有些文章上面说直接用JM109就可以表达,所以想试试,结果效果不好,谢谢大家的帮助.有好消息我马上告诉你们

• JK.jon (2014-7-03 18:04:38)

  我怎么搜不到《The QIAexpressist》,哪里有?

• shenkunjie (2014-7-03 18:05:04)

  
  JM109 含有 Lac qI ,按道理讲它就能抑制 pQE30 里的 lac promotor ，同样也能由 IPTG 诱导表达。 但是诱导表达的效果如何，我没有做过，不知道。 我使用的是 XL1-Blue, M15 和 SG13009 。 效果都不错。
  另附 Qiagen 的 The QIAexpressist， 压缩成了 2 个 part ,请合并压缩。

• shenkunjie (2014-7-03 18:08:55)

  
  part 2

• JK.jon (2014-7-03 18:09:26)

  
  我已经将其转入M15了,并按照:
  1 将过夜摇菌1:500接入LB培养基,即4微升接入2毫升,摇4小时.此时OD600为0.789.
  2 加入二倍即4毫升LB,再加入IPTG 60微升,摇了2小时
  可是结果还是未表达.唉!谁能指点指点问题在哪啊

• star#room (2014-7-03 18:09:44)

  
  首先确认你的质粒没问题
  另外可尝试直接挑菌（1个菌落/50ml培养液）摇至OD600至0.6-0.8，再加IPTG诱导，诱导时间可适当延长。这是我们实验室的常规做法。

• JK.jon (2014-7-03 18:12:02)

  
  我现在的测序结果显示下游引物缺失两个碱基，估计是它影响了表达。我准备再测一次正反两个反应，看结果如何。我会继续反馈信息的。谢谢大家近来的帮助。