见所未见：OptiMS拓展您的质谱潜能
鉴定翻译后修饰的位点
奥地利Innsbruck医学院生物中心临床生物化学部的Bettina Sarg博士
题目：Application of CESI-MS for the Analysis of Site-specific Protein Modifications
Bettina Sarg博士进一步介绍了用新型CESI-MS，在翻译后修饰鉴定方面的结果。Sarg博士首先介绍了翻译后修饰的作用。翻译后修饰会改变蛋白的物理化学 性质，比如折叠、稳定性、活性和功能等。对于组蛋白的研究发现，有一些压制性的修饰和一些活性的修饰，这些跟DNA结合的蛋白（如转录因子）有关。随 后，Sarg博士进行了翻译后修饰的实验，样品包括：来源于肿瘤细胞的过乙酰化（Hyperacetylated）的组蛋白H4，大鼠睾丸核心组蛋白，大 鼠睾丸连接器组蛋白，火鸡鸡胗的钙调结合蛋白（Turkey Gizzard Caldesmon）。比较的仪器为：（1）CESI-MS：PA800plus-LTQ-Orbitrap XL（目前的CESI 8000是PA800plus的升级新产品）；（2）nanoLC-ESI-MS：Ultimate3000 -LTQ-Orbitrap XL。
在对来源于肿瘤细胞的过乙酰化（Hyperacetylated）的组蛋白H4的分析中，用CESI-MS分析了天然蛋白，操作条件为：毛细管 30um ID, 88-100 cm，正电荷涂层M7C4l，BGE用0.1%甲酸，导电液体为0.1%甲酸，分离电压为25kV，喷雾电压为1.55kV，毛细管温度为25℃，分离电 流为1.3 uA。
对大鼠睾丸核心组蛋白，用CESI-MS分析翻译后修饰的多肽。实验用CESI-MS鉴定了H2A和H2B翻译后修饰的位点，并均具有高的序列覆盖率（H2A为90.0%，H2B为88.9%）。
Sarg博士还使用了IMAC磷酸化蛋白富集技术，对比使用CESI-MS和LC-MS的结果，其中CESI-MS的实验条件为，进样量8.5 nL，BGE用0.1%甲酸pH2.7，毛细管涂层用M7C4l，E=250 V/cm，ESI喷雾电压为1.7 kV。随后又把分离电压从25 kV改变到12.5 kV，可以鉴定出更多的磷酸化肽。使用IMAC磷酸化富集技术后，用CESI-MS和LC-ESI-MS共同鉴定的磷酸化肽为14个，仅用CESI-MS 鉴定出的有23个，仅用LC-ESI-MS鉴定出的为18个，两种技术共鉴定出55个。
CE-MS和LC-MS鉴定翻译后修饰位点的对比，CE-MS更容易鉴定小分子量的多肽
磷酸化肽的鉴定结果
在对火鸡鸡胗的钙调结合蛋白（Turkey Gizzard Caldesmon）的分析中，也使用IMAC磷酸化肽富集技术，使用LysC酶解钙调结合蛋白，用IMAC富集后，分别使用CESI-MS和LC- ESI-MS分离分析。结果表明，CESI-MS的灵敏度大概相当于LC-ESI-MS的40倍。而对于7个鉴定的磷酸化位点，当使用同样的进样量 时，CESI-MS和LC-ESI-MS同时可鉴定出第1、3种，CESI-MS单独鉴定出第4、5、6种，而LC-ESI-MS没有单独鉴定出的位点； 当使用40倍上样量后，LC-ESI-MS可单独鉴定出第2种，两种技术可同时鉴定出第1、3、5、6种，CESI-MS可单独鉴定出第4种。
火鸡鸡胗的钙调结合蛋白（Turkey Gizzard Caldesmon）的分析中，磷酸化肽鉴定结果对比
总结来看，CESI技术非常适于分析翻译后修饰（PTM）的多肽，并对PTM具有快速筛查的能力，对于分子量较小的肽来说，CESI技术提高了回收率， 因为这类小肽在反相柱上难以保留，利用CESI-MS技术，实验鉴定了组蛋白H2A和钙调结合蛋白的修饰位点，利用IMAC技术富集后，可更好地检测磷酸 化肽。
发布会当日座无虚席，听众还咨询了Lindner教授问题。Beckman公司会后进行了抽奖活动。
OptiMS技术：优化您的质谱性能
新型无鞘液的CESI-MS技术，对所有关注组学的研究者来说，是nanoLC-MS技术的有力补充：灵敏度高；发挥了低流速的优势、减少了离子抑制；可 鉴定更多小分子量的多肽。除举例的多肽混合物分析，该技术还非常适用于天然蛋白、代谢组学、药物和代谢产物等分析。
OptiMS可更换的组件：一套
新发布的CESI 8000，其CE-MS接口是成套的、可更换的装置，据公司称可使用数百次。根据多个质谱厂家，公司提供不同的接口，这些厂家包括：AB SCIEX、Thermo Scientific、Bruker Daltonics和Waters。
更多应用，小编也和读者一样，期待这种新技术能真正让Beckman重回组学市场，来个咸鱼大翻身！......
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