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【求助】做实验碰到鬼了......
最近几周接手一个食品专项抽查任务,样品数量和检测项目很多,我的两台液质24小时疲于奔命,从5月第一周开始到现在基本就没停过,一直都是人停机不停,本人也一直在疲于应付,除要完成自己的任务以外,还要协助其他同事,忙啊。到上周终于完成了主要的样品检测,才算能松口气,仪器也能休息一下了。【求助】做实验碰到鬼了......
本人负责的项目中有个是脱氧雪腐镰刀菌烯醇及衍生物,测定的是六个组分,这个是以前就开了的项目,前两周也做了40多份样品。上周4仪器空出来,想想以前的条件并不十分满意,就决定趁这个空隙来优化一下色谱质谱条件。第二天下午仪器出故障了,分子泵莫名其妙停了,由于仪器在质保期内,马上联系工程师来看,这个周一仪器工程师来检测,没什么大问题,由于前段时间带了个学生做课题,学生写论文的时候拷数据,电脑染上病毒(学生的U盘到处用的,不染上病毒才怪),工程师把系统重装了一遍。到中午就搞好了。这些都不是重点,因此我也不细说。
下午进了几针标准后开始出问题了,原来分离得不错、峰形也很好的六种物质,保留时间开始趋于集中了,第二天降低有机相比例也没效果。这一切都发生在流动相、色谱柱、色谱条件一点没变的情况下,流动相是上周配的同一瓶、标准也是是上周稀释配的同一瓶,色谱柱都没取下来过,除了进样时间不同,其他完全一样。真是见鬼了。
说了半天,这里交代一下仪器和色谱条件:仪器AB的QTRAP5500,色谱柱:安家的poroshell 120 EC-C18柱,2.1mm*150mm*2.7um,流动相A为含0.1%氨水的纯水,B为含0.1%氨水的乙腈,梯度洗脱,5分钟B从5%到30%,6-9分钟B为90%,再5%B平衡6分钟,流速为0.3ml/min。感觉这些色谱条件都不是重点,感觉重点是在仪器出故障的那个晚上用50+50的乙腈+水以0.2ml/min冲了一晚上的柱子,但这个是我经常做的事情,难道这次冲柱就对色谱柱产生了那么大的影响?
刚试着进了几针,依然如故,还在继续寻找原因中。。。
无图无真相,下面上图。。。。。
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最新回复
seven7 (2014-9-13 21:59:54)
这个是以前做的MRM图,结果一直比较稳定,六种组分也基本能分开。
仪器维修后,开始做的,保留时间开始变了,但也勉强能分开。
进了几针以后,峰基本挤到一个时间了,并且保留时间也稳定下来了。
改变流动相梯度条件,将有机相比例升高的速率降低,保留时间推后,但各个物质出峰仍在一个时间。。
mybioon (2014-9-13 22:00:25)
这个,工程师怎么讲?
seven7 (2014-9-13 22:01:00)
QUOTE:
来的是维修工程师,对这些技术上的不太懂。我也没问他。退一万步讲,我觉得也不应该是仪器的问题,质谱部分是不会影响到保留时间和分离度的。准备抽点时间来慢慢排查一下,看到底怎么回事。柱子是才用不久的新柱子,而且都是我在用,不会有问题。。。
这两天没空,下周,先从重新配个流动相开始。。
seven7 (2014-9-13 22:01:28)
有两个峰峰形不理想,看了下是平衡时间不够,后面几针结果开始在变好了,马上下班,明天看看,有新情况的话再来汇报。。。
wawa (2014-9-13 22:02:02)
这样看来是柱子使用出问题了,试剂问题还是操作问题?
seven7 (2014-9-13 22:02:27)
QUOTE:
想了半天,只有可能是用50+50乙腈水冲柱子的问题,可能是50+50的乙腈水,这个是我专门配来冲柱子用的,差不多有一个月了,用的是普通透明试剂瓶装的,莫非里面的乙腈分解了?因为以前发生过这种情况,乙腈放置久了,上机器时发现没有洗脱能力了。。但我换流动相冲了一天后不应该再出问题啊。。。
柱子采用不久,而且一直是我在用,维护得很好的,不应该有啥问题。。。
今天还在试。。
seven7 (2014-9-13 22:02:59)
新鲜热辣的图出炉了,这是中午12点做的图。对梯度做了小小的调整后,峰形与昨天相比已有明显改善。
准备晚上重新配个50+50的乙腈水冲过夜,明天再试试看。。。。
不过,貌似明天有同事想用机器,试验可能要推迟进行。。。
purrr (2014-9-13 22:03:21)
乙腈放久了会分解,还没有注意过。。。
seven7 (2014-9-13 22:04:07)
QUOTE:
我以前也没注意,因为我们买到一般都是进口名牌试剂,但去年确确实实遇到过一次。所以现在碰到问题会关注试剂有没有问题。。。wawa (2014-9-13 22:04:30)
seven7 (2014-9-13 22:04:48)
guagua (2014-9-13 22:05:10)
jingling845 (2014-9-13 22:05:30)
tudou85 (2014-9-13 22:05:54)
乙腈会分解?为嘛?
【求助】做实验碰到鬼了......